大鼠核轉錄因子（NF-κB）ELISA檢測試劑盒試劑盒內容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制 
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型 
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型 
標準品：8.0umol/L 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀 
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型 
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型 
生物素標記的抗NF-κB抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型 
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋 
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 
標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

安全性

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

大鼠核轉錄因子（NF-κB）ELISA檢測試劑盒操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
8.0 umol/L （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 
4.0 umol/L （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 
2.0 umol/L （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 
1.0 umol/L （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 
0.5 umol/L （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 
0.25 umol/L （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液 
0 umol/L （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
大鼠核轉錄因子（NF-κB）ELISA檢測試劑盒操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。