實(shí)驗(yàn)步驟：

1、石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水

2、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘（如需采用抗原修復(fù)，在此步驟后進(jìn)行）。

3、3%雙氧水去離子水（無色液體）孵育15-20 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。

4、滴加試劑A（藍(lán)色液體）室溫孵育15-20 分鐘，傾去，勿洗。

5、滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2-3 小時(shí)或4℃過夜。

6、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

7、滴加試劑B（黃色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

8、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

9、滴加試劑C（橙色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

10、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

11、顯色劑顯色（DAB 或AEC）

12、自來水充分沖洗。

13、如果需要，可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。

14、選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>

別    名  c-Kit (phospho Y936); c-Kit (phospho Tyr936); p-c-Kit (Tyr 936); C Kit; c-Kit; CD 117; CD117; CD117 antigen; KIT; KIT_HUMAN; Mast/stem cell growth factor receptor;

英文名稱  Anti-AFP(A2)   

中文名稱  磷酸化原癌基因c-kit抗體

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg

抗體來源  Rabbit

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse

產(chǎn)品類型  一抗  磷酸化抗體

研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶 細(xì)胞膜受體

蛋白分子量  predicted molecular weight: 107kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human c-kit around the phosphorylation site of Tyr936

產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

亞    型  IgG

純化方法  affinity purified by Protein A

儲 存 液  0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide

產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

（石蠟切片需做抗原修復(fù)）

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

保存條件  Store at -20 °C for one year.

含試劑：

1、一抗（應(yīng)用：IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 ）

2、無色試劑：內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑

3、試劑A：封閉用正常山羊血清工作液

4、試劑B：標(biāo)記二抗工作液：標(biāo)記羊抗兔IgG

5、試劑C：辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液

6、顯色液D液 (棕色) 1ml

7、顯色液E液（白色）20ml

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

安裝步驟與維護(hù)一）一抗稀釋的準(zhǔn)備：

方法1. 實(shí)驗(yàn)前，將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋（或PBS稀釋），將稀釋后的抗體分裝5-10支（20ulx5支或10ulx10支），放入-20℃保存，用一支拿一支，避免反復(fù)凍溶。

方法2. 實(shí)驗(yàn)前,也可將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋50ul（或PBS稀釋50ul）成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存，用多少吸多少。

方法3. 預(yù)試驗(yàn)可做幾個(gè)梯度1：100、200、400背景高還可做上去，選一個(gè)適合的稀釋比例，再正式做。工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。

二）DAB顯色液的制備實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：在1毫升試劑E（DAB 底物液）中，加入1滴（約50微升）試劑D（DAB濃縮液），混合均勻，即配成DAB工作液。此溶液必須現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后避光保存，6小時(shí)內(nèi)使用，剩余的液體應(yīng)棄去。標(biāo)本顯色時(shí)間一般為室溫 5~20分鐘，請?jiān)陲@微鏡下觀察顯色的情況，顯色充分后應(yīng)將標(biāo)本及時(shí)脫水封固。

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