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土壤β木糖苷酶 (SβXYS)熒光法

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-27 16:13:22瀏覽次數:145次

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貨號 GOY-01S6886
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商品屬性:

產品名稱

土壤β木糖苷酶 (SβXYS)熒光法

規格

100管/96樣

檢測方法

熒光法

貨號

GOY-01S6886

商品介紹:

測定意義

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類半纖維素降解的關鍵酶,產物木糖可作為碳源應用于微生物發酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業,比傳統的漂白法環保,具有廣泛的應用價值。

測定原理:

4-羥甲基-7-(MUB)在 365 nm波長處激發, 能在 470 nm處檢測到熒光, 它與某些物質結合后熒光特性消失, 通過酶的水解作用MUB釋放出來, 通過檢測熒光量來表征酶活性。

自備儀器和用品:

多功能酶標儀、恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水

實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg1克瓶裝,每瓶140000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔510分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

Standard for GC,>99.8%(GC)三苯基氯 97%人高香草酸(HVA) ELISA Kit  人高香草酸

無水乙 藥用級,99.5%三氟磺酸酐 98%人煙酰腺嘌呤二核苷酸(NADPH) ELISA Kit  人煙酰腺嘌呤二核苷酸

光譜純, ≥99.8%四丁基溴化磷 98%CNR-1(Human cadherln-related neuronal receptor1) ELISA Kit  人鈣粘蛋白相關的神經受體1

 電子級2-硫代酸 98%ATM(Human Ataxia angiectasia mutated) ELISA Kit  人擴張性共濟失調突變基因

分析標準品,>99.9%(GC)鈉 98%AhR(Human aryl hydrocarbon receptor) ELISA Kit  人芳香烴受體

農殘級, ≥99.8%四氯化硅 AR,99.50%SMAF(Human Specifie Macrophage Arming Paetot) ELISA Kit  人特異性巨噬武裝因子

AR,99.7%四氯化硅 99.9999%MF/MPF(Human maturation promoting factor) ELISA Kit  人促有絲分裂因子

CP,99.5%四氯化硅 99.999999%ATF-1(Human activating transcription factor-1) ELISA Kit  人轉錄因子抗體-1

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操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

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