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小鼠腎動脈內皮細胞

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 15:44:15瀏覽次數:122次

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原代細胞
細胞培養
貨號 GOY-01X0914
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產品名稱

小鼠腎動脈內皮細胞

規格

5×10?Cells/T25培養瓶

分類

原代細胞

貨號

GOY-01X0914

商品介紹:

名稱 小鼠腎動脈內皮細胞

2.組織來源:腎組織

3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介:

小鼠腎動脈內皮細胞分離自腎組織;腎臟是機體的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物,同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質,如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等,以調節水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能,生成腎素、促紅細胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等,又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機體內環境的穩定,使新陳代謝得以正常進行。腎動脈的分支為葉間動脈,穿行于腎柱內,上行至皮質與髓質交界處,形成與腎表面平行的弓狀動脈。小葉間動脈向被膜發出毛細血管,并向周圍的腎小體發出入球小動脈,進入腎小囊后形成球形的毛細血管網,再匯集成出球小動脈,出腎小體。直小動脈分支形成毛細血管網,再匯合成直小靜脈,入弓狀靜脈、葉間靜脈,最后匯合成腎靜脈經腎門出腎,注入下腔靜脈。腎動脈既是腎的營養血管,又是腎的機能血管,與腎泌尿機能密切相關。腎動脈在腎實質內形成兩個毛細血管網:腎小球毛細血管網,血壓較高,利于血漿濾過形成原尿;球后毛細血管網,血壓較低,利于腎小管的重吸。腎動脈內皮細胞是腎動脈的重要結構細胞之一,在機體的正常生理過程中發揮著重要作用。腎動脈內皮細胞主要功能有:在血漿濾過形成原尿的過程中起重要作用,在腎小管的重吸收過程中起重要作用,保持凝血和纖溶的動態平衡。

5.方法簡介:

()實驗室分離的小鼠腎動脈內皮細胞采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

()實驗室分離的小鼠腎動脈內皮細胞CD31免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息:

包被條件PLL0.1mg/ml),明膠(0.1%

培養基含FBS、生長添加劑、PenicillinStreptomycin

產品貨號CM-M060

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態內皮細胞樣

傳代特性可傳2-3

消化液0.25%

培養條件氣相:空氣,95%CO25%

使用方法:

收到細胞后,請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩定細胞狀態。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;

2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養液終止消化;

3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代,然后補充新鮮的*培養基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中培養;

4) 待細胞*貼壁后,培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。

 

培養操作:

1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;

1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
圖片13.jpg

細胞培養操作規程:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。

2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。

二.細胞處理:

1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

500mL TBS-Tween-20 (TTBS),10X TBS-Tween-20 (TTBS),10X 常溫保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Alpha-methylacyl-CoA racemase

10mL 鈷柱介質 Co-Agarose Resin 4℃保存 0.156-10 ng/mL 人細胞色素P450 2C9(CYP2C9)ELISA試劑盒

2 ug pSUPER-retro-GFP/Neo pSUPER-retro-GFP/Neo 低溫運輸,-2

小鼠腎動脈內皮細胞Phospho-Caveolin-1 (Tyr14)  磷酸化細胞質膜微囊蛋白-1抗體 規格: 0.1ml

NT-4/NT-5  神經生因子4/5抗體 規格: 0.1ml

100uL 6nt隨機引物(抗水解) Exo-Resistant Random Primer -20℃保存

2 ug pCMV-SPORT6 TMTC1 pCMV-SPORT6 TMTC1 低溫運輸,-20℃保存

250mlPreston肉湯均質袋(雙料)  250ml/袋*10

30µL α-Tubulin小鼠單抗 α-Tubulin Mouse MAb -20℃保存

2 ug pLVX-mCherry-C1 pLVX-mCherry-C1 低溫運輸,-20℃保存

卵黃瓊脂培養基基礎 Egg Yolk Agar Base 250g

2 ug pET-22b(+)  pET-22b(+)  低溫運輸,-20℃保存

2 ug pBlueScript KS(+) pBlueScript KS(+) 低溫運輸,-20℃保存

營養肉汁 Nutrient Broth 250g

200 mL 小鼠白細胞分離液1.093 Cell Separation Solution -20℃保存

 


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