細胞簡介：

大鼠胃平滑肌分離自胃組織；胃柔軟，活體呈橘紅色。胃空虛時形成許多皺襞，充盈時變平坦。胃壁由粘膜、粘膜下膜、肌膜和漿膜四層構成。粘膜上皮為柱狀上皮。上皮向粘膜深部下陷構成大量腺體（胃底腺、賁門腺、幽門腺），它們的分泌物混合形成胃液，對食物進行化學性消化。粘膜在幽門處由于覆蓋幽門括約肌的表面而形成環狀的皺襞叫幽門瓣。胃肌膜由三層平滑肌構成，外層縱形，中層環形，內層斜行，其中環形肌發達，在幽門處特別增厚形成幽門括約肌。胃平滑肌細胞源自胃的平滑肌層，細胞通過緊密連接，進行同步性運動，完成肌肉的舒縮活動，以推動食物前進，完成對食物的機械性消化，并促進化學性消化和吸收。胃平滑肌具有肌組織的共同特性，如興奮、自律性、傳導性和收縮性，在離體后，置于適宜的環境內，仍能進行良好的節律性運動，但其收縮很緩慢，節律性遠不如心肌規則。胃平滑肌對電刺激較不敏感，但對于牽張、溫度和化學刺激則特別敏感，輕微的刺激常可引起強烈的收縮。胃平滑肌的這一特性是與它所處的生理環境分不開的，胃內容物對平滑肌的牽張、溫度和化學刺激是引起內容物推進或排空的自然刺激因素。
方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠胃平滑肌采用膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠胃平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預冷的PBS中，盡可能的除去結締組織等，

3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養瓶中，倒置于細胞培養箱中，

4) 2h后，培養瓶中注入2 mL內皮培養基，小心將培養瓶正置于培養箱，確保組織塊不會飄起來，

5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內皮細胞重新鋪瓶。

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出T-25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置4-6小時或過夜，以穩定細胞狀態，然后換用新鮮培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入培養液終止消化，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）用適當量的凍存液（基礎培養基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養液5ml混勻細胞，然后將細胞懸液轉移至適當面積大小的培養皿中；

3）放置于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。