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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
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MEGM kit培養(yǎng)基

參  考  價(jià):1 - 560 /盒
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    經(jīng)銷商

  • 所在地

    上海市

更新時(shí)間:2025-05-30 15:52:41瀏覽次數(shù):64次

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原代細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)
保存條件 -20℃、避光 貨號 GOY-XP5146
產(chǎn)品規(guī)格 500ml 用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
MEGM kit培養(yǎng)基或許針對微血管內(nèi)皮細(xì)胞等設(shè)計(jì),助力相關(guān)細(xì)胞的培養(yǎng)與研究。包含兩部分:A部分是MEBM基礎(chǔ)培養(yǎng)液500ml,B部分是細(xì)胞生長添加劑5管

MEGM kit培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹:

MEGM kit培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹

(Lonza/Clonetics)備注:培養(yǎng)基包含(A+B)

A :  MEBM基礎(chǔ)培養(yǎng)液           500ml

保存條件:2-8℃

B:  細(xì)胞生長添加劑 5管          5管

1)       BPE            2.0ml

2)      hEGF           0.5ml

3)       INSULIN        0.5ml

4)     HYDROCORTISONE  0.5ml

5)       GA-1000         0.5ml

保存條件         :-20℃

規(guī)格

500ml

保存條件

-20℃、避光

貨號

GOY-XP5146

用途

僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

運(yùn)輸和保存:

MEGM kit培養(yǎng)基

運(yùn)輸:放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法:按照對應(yīng)保存條件保存12個(gè)月,配置好的培養(yǎng)基2℃~8℃,保存2個(gè)月;

質(zhì)量控制:

MEGM kit培養(yǎng)基

注意事項(xiàng):

MEGM kit培養(yǎng)基
1、收到產(chǎn)品請先檢查包裝是否完好,如有破損,漏液、渾濁等現(xiàn)象請及時(shí)聯(lián)系我們,培養(yǎng)基凍融后,可能會有少量絮狀物析出,不影響產(chǎn)品正常使用。

2、請仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書,了解產(chǎn)品使用方法、保存方式、有效期等信息,若因操作失誤,保存不當(dāng)而導(dǎo)致產(chǎn)品出現(xiàn)污染等問題的,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3、本產(chǎn)品僅能用于科研,培養(yǎng)基中的一些組分對人體有較低的危害性,如有接觸立即用大量清水沖洗即可。

培養(yǎng)操作:

MEGM kit培養(yǎng)基
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;

1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

MEGM kit培養(yǎng)基
一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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