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原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染困難的原因

時間:2018/1/25閱讀:423
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原代細(xì)胞是指細(xì)胞生長不依賴支持物表面,在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長,如淋巴細(xì)胞。在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常會遇到懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染,其和貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染還是有很大不同的。

目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室用的是脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是基于電荷吸引原理,先形成脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物,散布在細(xì)胞周圍,然后通過細(xì)胞的內(nèi)吞作用,將目的基因?qū)爰?xì)胞內(nèi),而脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的接觸機(jī)會比懸浮細(xì)胞高出很多倍,所以,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率要明顯低于貼壁細(xì)胞。

其次,脂質(zhì)體試劑的毒性較大,這就使得懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染更為困難了。另外,懸浮細(xì)胞不易培養(yǎng),易死亡,也給細(xì)胞轉(zhuǎn)染造成了一定的困難。

為了提高懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,可以使用非脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑,如engreen的Entranster試劑,納米材料的。也可以使用電轉(zhuǎn)染方法,針對懸浮細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染細(xì)胞還是挺不錯的,電擊對細(xì)胞有一定的損傷,選用具有細(xì)胞膜修復(fù)功能的電轉(zhuǎn)染試劑,可以將電擊對細(xì)胞的傷害降到Z低,如Entranster-E。

原代細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染,選對試劑及良好的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境才是關(guān)鍵。
 白介素-17CIgG    小鼠間粘附分子1(ICAM-1/CD54)
 白介素-17DIgG    小鼠間粘附分子1(ICAM-1/CD54)
 白介素-17EIgG    小鼠甲狀腺素(TAb)
 白介素-17FIgG    小鼠甲狀腺素(T4)
 白介素17受體CIgG    小鼠甲狀腺球蛋白(TG)
 白介素17受體DIgG    小鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)
 白介素17受體IgG    小鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)
 白介素1αIgG    小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)
 白介素1βIgG    小鼠甲基化酶(Methylase)
 白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6IgG    小鼠己糖激酶(HK)
原代細(xì)胞

 

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