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ATCC細胞分離液快速操作說明和使用及保存

時間:2018/5/31閱讀:279
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ATCC細胞分離液快速操作說明和使用及保存中的注意事項:

注意:1,分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果。

2,使用無靜電反應的離心管,推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。

3,所有操作過程一定要在無菌條件下進行。

4,*抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑

體積。

A. 小量分離-使用1-2ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血:

1,取新鮮抗凝血1-2ml,與全血及組織勻漿稀釋液(Cat#:2010C1119)1:1 混勻;

2,小心加于與混合液等體積的細胞分離液之液面上;

3,以400g(約1500 轉/分)離心15 分鐘(半徑15cm 水平轉子);

    此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環狀乳白色淋巴細胞層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含4-5ml 細胞洗滌液(Cat#:2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌2 次即得所需細胞。

B. 中量分離-使用5-10ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血:

1,取新鮮抗凝血5-10ml,與全血及組織勻漿稀釋液(Cat#:2010C1119)1:1 混勻;

2,將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上;(混合液:分離液=2:1)

3,以500g(約1800 轉/分)離心15 分鐘(半徑15cm 水平轉子);

    此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環狀乳白色淋巴細胞層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含10ml 細胞洗滌液(Cat#:2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌2 次即得所需細胞。

C. 大量分離I-使用20ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血:

1, 取新鮮抗凝血20ml 以200g(約1100 轉/分)離心20 分鐘棄去血漿;

2,向棄去血漿的血細胞中加入全血及組織勻漿稀釋液(Cat#:2010C1119)12ml 小心混勻;

3,將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上;(混合液:分離液=2:1)

4,以600g(約2000 轉/分)離心15 分鐘(半徑15cm 水平轉子);此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環狀乳白色淋巴細胞

層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含20ml 細胞洗滌液(Cat#:2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀ATCC細胞重新懸起。重復洗滌2次即得所需細胞。

人正常前列腺上皮細胞;RWPE-1

人羊膜細胞;WISH

人胚肺成纖維細胞;MRC-5

人胚胎肺成纖維細胞;WI-38

人胚腎細胞;293 [HEK-293]

人淋巴細胞;1301

人胚肺二倍體細胞;KMB-17

人胚肺成纖維細胞;WI-38 [WI38]

人臍靜脈內皮細胞(人膀胱癌細胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304]

人胚肺成纖維細胞;MRC-5

人羊膜細胞;WISH

人二倍體細胞;HEL
ATCC細胞

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