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微生物HMG-CoA還原酶ELISA試劑盒固體樣本的收集

時間:2020/3/11閱讀:350
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微生物HMG-CoA還原酶(HMG-COR)ELISA試劑盒固體樣本的收集 

1、組織標本:切割標本后,稱取 1g 組織,加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清。分裝一 份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就在液氮中充分研磨。

2、細胞內蛋白樣本:許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。

(1)培養的細胞

A、動物細胞:用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融(如果反復凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

B、植物細胞:用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到 100 萬/ml 左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設置破碎 2s,冷卻 30s 的方式,充分破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

(2)組織的細胞

切割標本后,稱取 1g 組織,加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),去除上清,再用 pH7.2-7.4左右的 PBS 小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。

3、細胞內蛋白樣本:許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。

4、咽拭子:加入 2ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。

5、植物標本:取組織塊(0.2g~0.5g)Z少可到 5~10mg 在冰冷的 PBS 中漂洗,濾紙拭干,準確稱重,放入 5ml 的勻漿管中;按重量(mg):體積(ml)=1:9 的比例加入 9 倍體積的勻漿介質于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊;勻漿的方式:手工勻漿,機器勻漿。 ① 手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉動研磨數十次(6~8 分鐘),充分研碎,制成 20%的勻漿液。 ② 機器勻漿:用組織搗碎機 10000~15000 轉/分 上下研磨制成 10%組織勻漿,也可用內切式組織勻漿機制備(勻漿時間 10 秒/次,間隙 30 秒,連續 3~5 次,在冰水中進行,可適當延長勻漿時間),鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片、染色均可以),顯微鏡下觀察細胞是否破碎,若沒有則可延長勻漿時間。將制備好的 10%勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機 4000 轉/分左右,離心 10~15 分鐘,取上清液進行測定。

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