小鼠雄烯二酮(ASD)ELISA試劑盒洗滌方法：

1. 自動洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時。

3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止)。

7.每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9(mouse MMP-9)

小鼠核轉(zhuǎn)錄因子(mouse NF-kB )

小鼠核轉(zhuǎn)錄因子p65(mouse NF-kBp65)

小鼠硝基酪氨酸(mouse Nitrotyrosine)

小鼠神經(jīng)肽Y(mouse NPY)

小鼠神經(jīng)生長因子(mouse NGF)

小鼠神經(jīng)營養(yǎng)素3(mouse NT-3)

小鼠神經(jīng)營養(yǎng)素4(mouse NT-4)

小鼠一氧化氮(mouse NO)

小鼠骨保護(hù)素(mouse OPG)

小鼠骨橋素(mouse OPN)

小鼠骨鈣素(mouse Osteocalcin)

小鼠8-羥基脫氧8-OHdG鳥苷酸(mouse 8-OHdG)

小鼠食欲素A(mouse Orexin A)

小鼠氧化低密度脂蛋白(mouse OxLDL)

小鼠抑瘤素mouse Oncostatin M(mouse OSM)

小鼠催產(chǎn)素(mouse Oxytocin)

小鼠骨保護(hù)素配體(mouse OPGL)

小鼠血小板活化因子(mouse PAF)

小鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(mouse PAP)

小鼠血小板相關(guān)抗體IgG(mouse PAIgG)

小鼠增殖細(xì)胞核抗原(mouse PCNA)