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膠體金標(biāo)記蛋白的制備

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膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值,在接近蛋白質(zhì)的等電點或偏堿的條件下,二者容易形成牢固的結(jié)合物。如果膠體金的pH值低于蛋白質(zhì)的等電點時,則會聚集而失去結(jié)合能力。除此以外膠體金顆粒的大小、離子強(qiáng)度、蛋白質(zhì)的分子量等都影響膠體金與蛋白質(zhì)的結(jié)合。

(1)待標(biāo)記蛋白溶液的制備 將待標(biāo)記蛋白預(yù)先對0.005Mol/L pH7.0 NaCl溶液中4℃透析過夜,以除去多余的鹽離子,然后100 000g4℃離心1h,去除聚合物。

(2)待標(biāo)膠體金溶液的準(zhǔn)備 以0.1Mol/L K2CO3或0.1Mol/L HCl調(diào)膠體金液的pH值。標(biāo)記IgG時,調(diào)至9.0;標(biāo)記McAb時,調(diào)至8.2;標(biāo)記親和層析抗體時,調(diào)至7.6;標(biāo)記SPA時,調(diào)至5.9~6.2;標(biāo)記ConA時,調(diào)至8.0;標(biāo)記親和素時,調(diào)至9~10.

由于膠體金溶液可能損壞pH計的電板,因此,在調(diào)節(jié)pH時,采用精密pH試紙測定為宜。

由于鹽類成分能影響金溶膠對蛋白質(zhì)的吸附,并可使溶膠聚沉,故致敏前應(yīng)先對低離子強(qiáng)度的水透析。必須注意,蛋白質(zhì)溶液應(yīng)澄清無細(xì)小微粒,否則應(yīng)先用微孔濾膜或超速離心除去。

一般情況下應(yīng)避免磷酸根離子和硼酸根離子的存在,因為它們都可吸附于顆粒表面而減弱膠體金對蛋白質(zhì)的吸附。

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