一、真菌毒素/霉菌毒素概述

真菌毒素是某些真菌在一定環(huán)境條件下產(chǎn)生的，危害人和動物的次級毒性代謝產(chǎn)物 。迄今發(fā)現(xiàn)超過400種真菌毒素，主要有黃曲素（AFB）、赭曲霉毒素A、展*、單端孢霉烯族毒素 中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和Ｔ-２ 玉米赤霉烯酮、伏馬毒素、雜色曲霉素、桔*等。真菌毒素主要由曲霉屬、青霉屬、鏈格孢屬和鐮刀菌屬中產(chǎn)生。這些微生物廣泛分布在植物、土壤和空氣當(dāng)中，可能污染谷物、大豆、堅果、水果、調(diào)味料、可可、咖啡、中草藥等植物性食物及其制品（如葡萄、啤酒）、飼料等。并可能在原料、加工、儲藏等環(huán)節(jié)污染食物或飼料，從而進(jìn)入食物鏈 。世界糧農(nóng)組織統(tǒng)計顯示，每年*有25％的谷物受到真菌毒素污染，由此，美國年均損失約93.2億美元 。另外谷類和堅果中的真菌毒素可能是非洲、亞洲和南美洲消費者面臨的食品中zui主要的不安全因素 。

二、茶葉中存在哪些真菌毒素/霉菌毒素

 近年來關(guān)于茶葉尤其普洱茶等經(jīng)過微生物發(fā)酵茶葉的真菌毒素污染已引起消費者的關(guān)注。茶葉是指茶樹的干燥嫩葉與嫩莖，已成為世界上除了水之外消費zui多的飲料，其安全性對消費者的健康以及茶葉產(chǎn)業(yè)發(fā)展尤其重要。產(chǎn)毒真菌分布廣泛，茶園土壤和加工車間等都有可能存在，茶葉加工可能受到產(chǎn)毒真菌污染。雖然干燥環(huán)節(jié)可能殺滅紅茶、綠茶中的大多數(shù)微生物，但干燥之后如果包裝、貯藏不當(dāng)，尤其茶葉吸濕受潮之后，可能受到真菌和真菌毒素污染。而普洱茶、茯磚茶等黑茶后發(fā)酵過程及產(chǎn)品中本身存在曲霉屬、青霉屬等多種真菌菌種， 也可能受真菌毒素污染 。但目前僅見印度對紅茶的黃曲素（AFB）做了*規(guī)定（30ug/kg）。GB2761—2017未規(guī)定茶葉制品真菌毒素*。

 2.1. 紅茶真菌毒素相關(guān)研究

紅茶是指茶樹鮮葉經(jīng)過萎凋、揉捻、發(fā)酵、干燥等步驟生產(chǎn)出來的茶葉產(chǎn)品，是世界上產(chǎn)量zui大的茶葉類別，也是除中國、日本外其他國家的主要消費品種，因此目前關(guān)于紅茶污染真菌毒素的研究報道相對較多。

早在1974年，日本學(xué)者Hitokoto等就開展了東京市售茶葉毒素產(chǎn)生菌污染的研究，從東京市售的19份紅茶樣品中，分離得到259 株泡盛曲霉，檢測發(fā)現(xiàn)這些真菌可在酵母蔗糖培養(yǎng)基上產(chǎn)生雜色曲霉素，表明紅茶受到了毒素產(chǎn)生菌的污染。Abdel-Hafez等應(yīng)用薄層層析測定發(fā)現(xiàn)，4份紅茶粉樣品受到黃曲素（AFB）B1和B2污染，含量為2.8~2.17 mg/kg。Hasan 等從埃及市售的20個品牌紅茶粉中分離得到多株黃曲霉，檢測發(fā)現(xiàn)其中15 株可產(chǎn)黃曲霉(AFB)B1，B2，G1和G2，5株可產(chǎn)生黃曲素（AFB）B1和B2；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，茶葉接種產(chǎn)毒菌株后，可產(chǎn)生黃曲素（AFB），且毒素含量隨含水量增大而增加；茶葉含水量45％，28℃，培養(yǎng)20d的條件下毒素含量zui大，可達(dá)26～ 81ug/kg。Elshafie 等從購于馬斯喀特的４ 個品牌48份紅茶樣品中，分離鑒定出５種真菌，進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)分離的25株黃曲霉均不產(chǎn)生黃曲素（AFB）。Ostry等在紅茶中檢測到了可能產(chǎn)生黃曲素（AFB）的黃曲霉菌株。Martins等測定發(fā)現(xiàn)，購于里斯本的18份紅茶樣品中，有16份樣品污染了伏馬菌素Ｂ1，含量為80~280ｍｇ/ｋｇ，未檢測到伏馬菌素Ｂ2。Miraglia報道，1995-1998年歐盟國家檢測了139份紅茶樣品，其中8份樣品中赭曲霉毒素A陽性， 含量為0.03~10.3 μｇ/ｋｇ。Hasan發(fā)現(xiàn)接種黃曲霉菌株之后，紅茶中的黃曲素（AFB）是普通茶葉的5倍。Ｒ?ｅｚáｃ等分析發(fā)現(xiàn)，布拉格市售的10個紅茶樣品受到真菌污染，但符合捷克的標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)毒試驗表明分離的真菌不產(chǎn)黃曲素（AFB）。Santos 等應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測了西班牙市售的包括紅茶在內(nèi)的84個藥用或芳香植物中的黃曲素（AFB）、赭曲霉毒素Ａ、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、Ｔ-2毒素、桔*和伏馬菌素，發(fā)現(xiàn)樣品普遍受到毒素污染。Mogensen 等發(fā)現(xiàn)從紅茶中分離到的Aspergillusacidus不產(chǎn)生赭曲霉毒素A、伏馬菌毒素Ｂ2 和Ｂ4。Monbaliu等建立了一個可同時測定27 種真菌毒素的超液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，檢測了91份茶葉樣品，結(jié)果只有1 份樣品檢測到伏馬菌素B1（76ug/kg）。

 研究發(fā)現(xiàn)紅茶中真菌數(shù)量及毒素含量與含水量有關(guān)，茶葉受潮后真菌會大量繁殖、產(chǎn)生毒素。真菌孢子在加工的很多環(huán)節(jié)都可能污染紅茶、綠茶等茶葉產(chǎn)品，但真菌生長及產(chǎn)生毒素需要一定的水分，如果茶葉干燥*、貯藏過程不受潮，即使茶葉含有真菌孢子，但不會繁殖，也不會產(chǎn)生真菌毒素。因此，對于紅茶、綠茶等茶葉加工企業(yè)來說，可以通過*干燥、及時包裝或真空包裝、儲存運(yùn)輸過程不受潮，來降低或杜絕真菌毒素污染的風(fēng)險。對于茶葉消費者來說，打開包裝之后應(yīng)檢查茶葉是否霉變、開封后的茶葉必須干燥存放、勿飲用霉變茶葉，避免受到真菌毒素危害。

 2.2. 黑茶真菌毒素研究

  黑茶指制造工序為鮮葉經(jīng)殺青、揉捻、渥堆（后發(fā)酵）、干燥，成品茶呈油黑或黑褐的茶種。主要有云南普洱茶、湖南茯磚茶、四川康磚茶、廣西六堡茶等。由于*品質(zhì)及良好的保健功效，近年來黑茶產(chǎn)量及消費量都逐漸增大。但普洱茶等黑茶加工有一個多種微生物作用的后發(fā)酵過程，這些微生物可能產(chǎn)生毒素。如普遍認(rèn)為的普洱茶發(fā)酵優(yōu)勢菌黑曲霉是一般*安全的微生物，但近年來發(fā)現(xiàn)黑曲霉的某些菌株可能產(chǎn)生赭曲霉毒素和伏馬毒素；茯磚茶的優(yōu)勢菌散囊菌屬的一些菌種也可產(chǎn)生赭曲霉毒素和伏馬毒素等真菌毒素。目前有關(guān)黑茶真菌毒素污染的風(fēng)險已經(jīng)引起了廣泛的關(guān)注，部分學(xué)者開展了相關(guān)研究。

Hitokoto 等分析了共１１ 份茶葉樣品，其中２ 份為普洱茶樣品，發(fā)現(xiàn)普洱茶真菌數(shù)量zui多，優(yōu)勢菌是雜色曲霉和聚多曲霉；其中１ 株雜色曲霉在小麥培養(yǎng)基上產(chǎn)生了雜色曲霉素，但在綠茶中未產(chǎn)生毒素；聚多曲霉在葡萄糖酵母和小麥培養(yǎng)基上均不產(chǎn)生毒素。陳秋娥分析了44 件中國臺灣市售普洱茶樣品，未檢測到黃曲素（AFB）、赭曲霉毒素Ａ、雜色曲霉素和桔*；同時陳秋娥還研究了黃曲霉在普洱茶發(fā)酵中的產(chǎn)毒素情況，發(fā)現(xiàn)不接種黃曲霉菌株的普通發(fā)酵（對照組）和不滅菌茶葉接種黃曲霉菌株的發(fā)酵樣品均未檢出黃曲素（AFB）；滅菌茶葉接種黃曲霉菌株的樣品檢出黃曲素（AFB）（1.05 ug／kg），該研究表明正常的普洱茶發(fā)酵過程不會產(chǎn)生黃曲素（AFB）。Abe等應(yīng)用HPLC 檢測發(fā)現(xiàn)，從普洱茶中分離的黑曲霉不產(chǎn)生赭曲霉毒素A和伏馬菌素。Mogensen等檢測發(fā)現(xiàn)，從普洱茶樣品中分離的Aspergillusacidus不產(chǎn)生赭曲霉毒素A、伏馬菌毒素Ｂ2和Ｂ4。ＨＯＵ 等檢測發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用黑曲霉和炭黑曲霉（Ａ.Carbonarius）發(fā)酵的茶葉樣品不含赭曲霉毒素A和伏馬菌素。陳建玲等隨機(jī)抽查廣州某茶葉市場濕倉儲存的普洱茶７０ 份樣品，發(fā)現(xiàn)其中８ 份樣品（11.43％） 黃曲素（AFB）Ｂ1>5μｇ/ｋｇ，63份樣品（90％）脫氧雪腐鐮刀菌烯醇污染＞ １ ｍｇ/ｋｇ，伏馬毒素（Ｂ1 和Ｂ1）和Ｔ-２ 毒素毒素含量雖然都分別小于１mg/kg 和100μｇ/ｋｇ，但在樣品中均可檢出，應(yīng)引起廣泛重視。ZHANG等應(yīng)用免疫層析法檢測，并用液相色譜?質(zhì)譜法（HPLC-MS）驗證，發(fā)現(xiàn)５ 份普洱茶樣品都含有黃曲素（AFB），含量為４.９ ～５９.３ μｇ/ｋｇ。柳其芳應(yīng)用酶聯(lián)免疫測試盒測定，發(fā)現(xiàn)普洱茶黃曲素（AFB）污染水平超過２０ μｇ/ｋｇ 的有１０ 份（16.6％），脫氧雪腐鐮刀菌烯醇污染水平超過1000μｇ／ ｋｇ 的有13份（23.0％）；玉米赤霉烯酮、伏馬菌素、赭曲霉毒素、Ｔ-２ 毒素在樣品中均可檢出。Haas等檢測了３６ 份普洱茶樣品，未檢測到黃曲霉(AFB)（Ｂ1，Ｂ2，Ｇ1和Ｇ2）和伏馬菌素（Ｂ１，Ｂ２ 和Ｂ３），４ 份樣品檢測到赭曲霉毒素Ａ，含量為0.６５ ～ ９４.７ μｇ/ｋｇ。趙浩軍等應(yīng)用ＨＰＬＣ 方法檢測了市售普洱茶２ 份樣品，均未檢出黃曲素（AFB）Ｂ1。

   陳秋娥接種黃曲霉菌株發(fā)酵普洱茶的研究表明，正常的普洱茶發(fā)酵過程不會產(chǎn)生黃曲素（AFB），Ａbe等、Ｍogensen 等和ＨOU等３ 個獨立研究都表明，普洱茶發(fā)酵過程的曲霉菌種不產(chǎn)生赭曲霉毒素Ａ 和伏馬菌素。以上研究均表明，正常的普洱茶發(fā)酵不會產(chǎn)生真菌毒素。由于樣品及測定方法不同，關(guān)于普洱茶產(chǎn)品中真菌毒素檢測的報道不一致。陳建玲等、ＺＨＡＮＧ 等和柳其芳檢測的普洱茶樣品較大程度受到黃曲素（AFB）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、伏馬毒素和Ｔ-２ 毒素污染；而陳秋娥 和趙浩軍等分別檢測了44和2份市售普洱茶樣品，未檢出毒素。Ｈaas 等分析了36 份樣品的８ 種真菌毒素，僅4份樣品檢測到赭曲霉毒素Ａ。

   近年來有關(guān)黑茶的真菌毒素污染引起了廣泛關(guān)注，應(yīng)加強(qiáng)過程控制，檢測發(fā)酵過程真菌是否產(chǎn)生毒素；篩選、應(yīng)用不產(chǎn)毒素菌株發(fā)酵并監(jiān)測是否產(chǎn)毒，建立安全的黑茶發(fā)酵技術(shù)體系。

 2.3. 其他茶葉真菌毒素研究

 有關(guān)綠茶、白茶中真菌毒素的研究不多，僅Ｒｅｅｚáｃˇｏｖá 等分離１０ 份捷克市售綠茶樣品中的真菌，發(fā)現(xiàn)均不產(chǎn)生黃曲素（AFB）。Ｓantos等檢測了西班牙市售的綠茶和白茶樣品，發(fā)現(xiàn)部分檢測樣品受到黃曲素（AFB）、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、Ｔ-２ 毒素和桔*污染。趙浩軍等檢測了2份綠茶樣品，未檢出黃曲霉(AFB)Ｂ1。

綜上，無論黑茶、紅茶、綠茶都可能受到真菌毒素的污染。飲用真菌毒素污染的茶葉對健康不利，但另一方面，也有大量文獻(xiàn)研究表明，綠茶、紅茶、普洱茶等都具有“解毒”作用，可以降低黃曲霉等真菌毒素的毒性。因此今后應(yīng)開展茶葉真菌毒素的風(fēng)險評估研究，準(zhǔn)確評估茶葉中真菌毒素對人體健康的風(fēng)險。我國茶葉加工工藝與制品類別眾多，生產(chǎn)廠家也很多，且多數(shù)規(guī)模不大，因此更應(yīng)重視茶葉可能受到毒素污染的情況。建議開展不同品種茶葉制品真菌毒素檢測研究，普查各類茶葉制品受到真菌毒素污染情況，并根據(jù)真菌毒素污染情況，制定茶葉毒素的*。對于有微生物參與發(fā)酵的茶類（如黑茶），通過應(yīng)用不產(chǎn)毒素菌株發(fā)酵、監(jiān)控發(fā)酵過程毒素等措施建立安全的發(fā)酵技術(shù)。我國茶葉企業(yè)與監(jiān)管機(jī)構(gòu)應(yīng)加強(qiáng)茶葉毒素的過程控制及監(jiān)測，降低茶葉受到真菌毒素污染的風(fēng)險，以保障飲用安全。

三、上海飛測生物茶葉中真菌毒素/霉菌毒素快速定量檢測方案--8min準(zhǔn)確定量

上海飛測生物基于的熒光定量FPOCT技術(shù)平臺，推出了常見的六種真菌毒素?zé)晒舛靠焖贆z測系統(tǒng)，包含真菌毒素檢測儀和真菌毒素熒光定量快速檢測試紙條，可在8min快速準(zhǔn)確定量的檢測出茶葉中真菌毒素的殘留含量，樣品前處理簡單，檢測操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠且可現(xiàn)場打印，準(zhǔn)確性符合HPLC法的檢測結(jié)果，適用于各類茶葉加工企業(yè)、第三方檢測機(jī)構(gòu)及政府監(jiān)管部門。

3.1. 上海飛測生物真菌毒素?zé)晒舛繖z測試紙條性能

3.2. 以檢測茶葉中的黃曲霉(AFB)為例：

黃曲霉(AFB)B1熒光定量快速檢測系統(tǒng)性能

 檢測靈敏度：0.5μg/kg；

 定量線性范圍：1.0μg/kg - 75.0μg/kg；

 樣品前處理時間：7min；

 檢測時間：8min；

 準(zhǔn)確度：回收率為80%-125%；

 特異性：在1000μg/kg濃度水平下與其它真菌毒素?zé)o交叉反應(yīng)；

3.3. 樣品前處理過程

1、 粉碎（茶葉樣品粉碎處理）；

2、 振蕩提取（5min）；

3、 離心（2min）；

3.4. 檢測操作過程

1、 稀釋；

2、 加樣反應(yīng)（8min）；

3、 讀數(shù)，打印檢測報告； 

3.5. 結(jié)果判讀和輸出

    采用便攜式黃曲霉(AFB)檢測儀進(jìn)行讀數(shù)，使得檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確、客觀，避免人為的誤判。

    檢測結(jié)果將呈現(xiàn)于熒光讀數(shù)儀液晶顯示屏上，同時可按打印鍵打印獲得紙質(zhì)的檢測報告，另外，開通儀器的WIFI數(shù)據(jù)上傳功能后，檢測相關(guān)數(shù)據(jù)信息將自動上傳至“食品安全溯源管理云平臺”，便于溯源及質(zhì)量管理。

3.6. 上海飛測生物真菌毒素系列熒光定量檢測產(chǎn)品亮點