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酶聯(lián)免疫測(cè)定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

閱讀:165發(fā)布時(shí)間:2017-3-31

IL-2Relisa試劑盒免疫測(cè)定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)主要涉及到抗體或抗原的使用濃度、溫育溫度、溫育時(shí)間、測(cè)定模式是采用競(jìng)爭(zhēng)抑制或雙夾心直接測(cè)定,以及雙夾心測(cè)定是采用一步還是兩步法等,其對(duì)測(cè)定的影響主要是試驗(yàn)的測(cè)定下限、特異性核簡(jiǎn)便性等。一般來說,較高的抗體或抗原反應(yīng)濃度、較高的溫育溫度(如37~C而非室溫下)、較長(zhǎng)的溫育時(shí)間可以改善免疫試驗(yàn)的測(cè)定下限,但這一切又只是相對(duì)的,還要從試劑的實(shí)際應(yīng)用著想,進(jìn)行合理的優(yōu)化。

IL-2Relisa試劑盒雙抗夾心酶免疫試劑由于其簡(jiǎn)單方便,又具有較好的測(cè)定下限和特異性,在大多數(shù)蛋白激索和腫瘤標(biāo)志物的測(cè)定上,現(xiàn)已基本上取代了放免競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)。雙抗夾心測(cè)定模式以兩步法進(jìn)行(即臨床樣本與酶標(biāo)抗體分兩步加入),可避免許多用一步法時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)的問題,如與標(biāo)記抗體可能發(fā)生交叉反應(yīng)但與固相捕獲抗體無交叉反應(yīng)的物質(zhì)可在步溫育后的洗滌步驟中去除;又如一步法常出現(xiàn)的“鉤狀”效應(yīng)(即抗原濃度很高時(shí)反應(yīng)顯色反而很淺,表現(xiàn)為測(cè)假陽(yáng)性)使用兩步法就可以避免。

但由于兩步法所需測(cè)定時(shí)間相對(duì)要長(zhǎng)一些,因此目前在臨床實(shí)驗(yàn)中使用較多的是一步法。此外,IL-2Relisa試劑盒當(dāng)所測(cè)物質(zhì)分子大小不一致時(shí),大分子的反應(yīng)通常較小分子要慢,如溫育時(shí)間短,也會(huì)造成測(cè)定偏差。例如,在測(cè)定復(fù)合的前列腺特異抗原(PSA)(Mr90Kd)時(shí),如使用較短的溫育時(shí)間,與游離PSA相比,其結(jié)果將偏低。


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