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原裝ELISA試劑盒與酶免elisa的原理差異運用須知

閱讀:216發布時間:2017-6-13

酶免ELISA試劑盒是運用雙抗體夾心法測定標本中大鼠載脂蛋白M(APO-M)水平。用純化的大鼠載脂蛋白M(APO-M)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中順次參加載脂蛋白M(APO-M),再與HRP符號的載脂蛋白M(APO-M)抗體,構成抗體-抗原-酶標抗體復合物,通過*洗刷后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的效果下轉化成終究的黃色。ELISA試劑盒色彩的深淺和樣品中的載脂蛋白M(APO-M)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過規范曲線核算樣品中大鼠載脂蛋白M(APO-M)濃度。
原裝ELISA試劑盒的基本原理:
1)抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接構成酶物,而此種酶物仍能堅持其免疫學和酶學活性;
2)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體外表,也許是蛋白和聚苯乙烯外表間的疏水性有些彼此吸附,并堅持其免疫學活性;
3)酶物與相應抗原或抗體后,可根據參加底物的色彩反響來斷定是不是有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,因而,能夠按底物顯色的程度顯示試驗成果。
原裝ELISA試劑盒與酶免elisa運用須知:
酶免elisa運用須知:
1)嚴厲依照說明書的操作進行,試驗成果斷定有必要以酶標儀讀數為準。
2)試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可運用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保留。
3)請每次測定的同時做規范曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于規范品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(n倍)后再測定,核算時請zui終乘以總稀釋倍數(×n×5)。
4)封板膜只限一次性運用,以避免交叉污染。
5)濃洗刷液也許會有結晶分出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗刷時不影響成果。
6)各步加樣均應運用加樣器,并常常校對其準確性,ELISA試劑盒以避免試驗誤差。一次加樣時刻控制在5分鐘內,如標本數量多,引薦運用排槍加樣。
7)所有樣品,洗刷液和各種廢棄物都應按感染物處理。
8)本試劑不一樣批號組分不得混用。
9)底物請避光保留。
原裝ELISA試劑盒運用須知:
1)顯現微量的免疫沉淀反響。
2)免疫酶染色各種細胞內成份的定位。
3)定量檢查體液中抗原或抗體成份。
4)研討抗酶抗體的組成。
他們也許存在的壞處:
ELISA試劑盒是現在運用zui廣泛的免疫符號檢查辦法。但由于ELISA本身存在的缺點和某些人為要素都可形成試驗性誤(漏)診的發作,剖析引起試驗誤差要素:
1)試劑的運送與儲存ELISA試劑盒熱穩定性差,遇熱后靈敏度、特異性都將下降。在37℃下放置1d相當于4℃~10℃保留1.6個月,而ELISA試劑盒的貨架壽數只有6個月,這么就請求試劑盒的在4℃~10℃下運送儲存,各試驗室教師在試劑盒儲存環節上都能到達請求,但現在尚無法確保試劑盒的冷鏈運送,在炎熱的夏日,試劑盒通過幾天的高溫,ELISA試劑盒長途運送,其貨架壽數也將耗費殆進,如各試驗室還按試劑說明書的有效期運用至6個月,將無法確保檢查成果的準確性。
2)試劑盒質量試劑盒質量是關系到ELISA檢查成果準確度的核心問題,現在ELISA試劑盒的廠家和品牌眾多,產品質量也良莠不齊。


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