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技術文章

這樣做ELISA試劑盒實驗*

閱讀:207發布時間:2017-6-20

ELISA試劑盒能夠簡略、地從瓊脂糖凝膠上純化收回DNA段,一起除掉蛋白質、其它有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質。可收回100bp–40 kb DNA段,可純化高達10μg的DNA段,收回率可達80%以上(<100bp或>10kb的DNA段收回率為30–50%)。運用ELISA試劑盒收回的DNA可適用于各種慣例操作,包含酶切、PCR、測序、文庫挑選、銜接和轉化等各種分子生物學試驗。
ELISA試劑盒注意事項:
1、 不一樣廠家出產的試劑盒因出產工藝和操作方法略有不一樣,必須按照所用試劑盒嚴厲操作,不然簡單發生檢查成果的不確定性.
2、 若不一樣批號試劑的不一樣組分(A液或酶工作液),或不一樣試劑的不一樣組分進行穿插運用,有也許呈現顯色淺或本底高,花板等景象。
3、 加樣時樣品量差錯,關于陰或很陽的標本影響不大,但對閾值鄰近的標本影響極大,主張校正加樣器。
4、 反應時間的差錯,做很多標本時,孔和zui終一孔以及一些特別標本也許影響較大。
5、 因為滴瓶的精密性必定不如加樣器,不掃除不一樣滴頭滴量的差錯。另外滴加過程中是不是發生氣泡、速度是不是均勻,是不是顫抖等影響液量的要素均可致使以上狀況。高標準請求時應運用加樣器。
6、 閾值鄰近實際上是個灰區(gray scale),不能截然分為陰性、陽性,國外廠家均請求對這有些可疑標本進行奇數次復檢,以次數多者為準,如一次陽兩次陰zui終判為陰,但實際上是不是為陰不好說,只要判為可疑,臨床上能夠讓患者過一段時間后再測。
7、 肉眼調查稍顯色,酶標儀打印為陰性的標本在實際工作中是難以避免的,肉眼目測成果不可靠,應以酶標儀判讀為準。
8、 由陰性變為強陽性因素多為操作過程中漏加試劑等有關。
9、 ELISA試劑盒臨界值鄰近標本波動為正常景象,任何ELISA試劑盒均不可避免。能夠考慮將標本做奇數次復檢。

 


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