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技術(shù)文章

ELISA試劑盒雙抗夾心法

閱讀:203發(fā)布時(shí)間:2017-6-30

1.ELISA試劑盒包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml,4℃ 。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗刷緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗刷,下同)。
2. 加樣:加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗刷。(一起做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗刷。
4. 加底物液顯色:于各反響孔中參加暫時(shí)制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反響:于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
6. 成果斷定:可于白色布景上,直接用肉眼調(diào)查成果:反響孔內(nèi)色彩越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反響為無色或極淺,根據(jù)所呈色彩的深淺,以“+"、“-"號(hào)表明。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)則的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
ELISA試劑盒間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃;
2.次日洗刷3次;
3.加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷;
4.(一起做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘,洗刷;
6.ELISA試劑盒zui終一遍用DDW洗刷。
其余過程同“雙抗體夾心法"的4、5、6。


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