1.ELISA試劑盒包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml，4℃ 。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗刷，下同）。
2. 加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗刷。（一起做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗刷。
4. 加底物液顯色：于各反響孔中參加暫時(shí)制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反響：于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
6. 成果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼調(diào)查成果：反響孔內(nèi)色彩越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反響為無色或極淺，根據(jù)所呈色彩的深淺，以“+"、“-"號(hào)表明。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)則的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
ELISA試劑盒間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；
2.次日洗刷3次；
3.加必定稀釋的待檢樣品（不知道抗體）0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷；
4.（一起做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗刷；
6.ELISA試劑盒zui終一遍用DDW洗刷。
其余過程同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
會(huì)員1.png)