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技術(shù)文章

ELISA試劑盒試驗具體操作過程和注意事項

閱讀:288發(fā)布時間:2017-7-5

ELISA試劑盒試驗前預(yù)備:
1、運用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置zui少30分鐘。
2、預(yù)備各種試驗儀器及資料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等。
3、濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1:19倍稀釋后變成運用洗刷液。
4、濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1:4倍稀釋成運用樣品稀釋液。
5、用運用樣品稀釋液來稀釋樣品,按照1:100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品參加到1ml的運用樣品稀釋液中,充分混勻待用。
ELISA試劑盒操作過程:
1、取出酶標(biāo)板,設(shè)空白孔,按照次第對應(yīng)別離參加100μl的規(guī)范品于空白微孔中(空白孔視為0號規(guī)范品,用醫(yī)用蒸餾水代替);
2、別離符號樣品編號,參加100μl的稀釋樣品于空白微孔中(不一樣的樣本選用不一樣的吸頭);
3、將酶標(biāo)板置于37℃溫育30分鐘;
4、將酶標(biāo)板板取出,將其間的液體甩去,每個孔中悉數(shù)加滿運用洗刷液后,當(dāng)即甩去液體;
5、每個孔中加滿運用洗刷液后,細(xì)微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的運用洗刷液甩去,在吸水紙大將酶標(biāo)板拍干;
6、重復(fù)第5個過程5次,在吸水紙大將酶標(biāo)板拍干;
7、在規(guī)范品孔和樣品孔中參加100μl的酶標(biāo)巧合溶液;
8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘;
9、將酶標(biāo)板取出,將其間的液體甩去,每個孔中悉數(shù)加滿運用洗刷液后,當(dāng)即甩去液體;
10、每個孔中再次加滿洗刷運用液后,室溫細(xì)微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的運用洗刷液甩去,在吸水紙大將酶標(biāo)板拍干;
11、重復(fù)第5個過程5次,在吸水紙大將酶標(biāo)板拍干;
12、在每個孔中參加底物A 50μl后當(dāng)即參加底物B 50μl。悄悄振動混勻。(A液、B液選用不一樣的吸頭加樣);
13、將酶標(biāo)板置于37℃避光溫育反響15分鐘;
14、每個微孔中參加50μl的停止液,悄悄振動混勻;
15、在酶標(biāo)儀上,450nm處測定OD; 顯色后,15分鐘內(nèi)進(jìn)行測定;
16、根據(jù)制備的規(guī)范曲線,核算樣本含量。
ELISA試劑盒留意事項:
1、此試劑為體外檢查試劑,效期內(nèi)運用,試劑應(yīng)視為感染物,不一樣總批號的試劑不能混用。
2、運用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置zui少30分鐘,
3、濃縮洗刷液呈現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘。
4、濃縮樣品稀釋液呈現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘
5、若24小時內(nèi)進(jìn)行試驗,標(biāo)本可存放于2~8℃。不需及時試驗,標(biāo)本-20℃保留,防止重復(fù)凍融。
6、在重復(fù)清洗微孔板,并扣干微孔中的剩余液體,否則將降低度,形成吸光度偏離的假像。
7、加樣結(jié)束后,應(yīng)留意細(xì)微搖動微孔反響條,以便使孔中的液體充分混勻。
8、試劑盒保留于2~8℃,請勿冷凍,有效期請見盒內(nèi)標(biāo)明。

 


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