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公司動(dòng)態(tài)

ELISA試劑盒的比色測(cè)定抗體含量

閱讀:128發(fā)布時(shí)間:2017-7-10

現(xiàn)在常用的幾種ELISA試劑盒辦法有:測(cè)定抗體的直接法,測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本實(shí)驗(yàn)選用直接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要進(jìn)程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反響板的凹孔內(nèi),加待測(cè)抗體,保溫后洗刷以除去未的雜蛋白質(zhì),加酶標(biāo)抗抗體,保溫后洗刷,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿停止酶促反響,用目測(cè)或光電。
①抗原包被:兔抗人IgG ELISA試劑盒作為抗原,用包被液l:8000稀釋?zhuān)?00μL/孔參加聚苯乙烯96孔反響板中。4℃放置過(guò)夜。
②洗刷:次日傾去凹孔內(nèi)的液體,洗刷液洗3次。
③關(guān)閉:加l00μL/孔關(guān)閉液,室溫放置0.5h.
④洗刷:用洗刷液洗3次。
⑤加待測(cè)樣品(一抗):將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 接連稀釋(依照1:2或1:10),100μL /孔加到 已包被的板上,每個(gè)樣品平行做兩份,PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照,已知樣品作為陽(yáng)性對(duì)照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗刷:用洗刷液洗3次。
⑦加酶標(biāo)抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP,用關(guān)閉液l :8000稀釋?zhuān)?00μL/孔,加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗刷:用洗刷液洗5次,蒸餾水洗2次。
⑨顯色:加新鮮配制的底物溶液100μL/孔,室溫暗處放置5~30min,顯示藍(lán)色。
ELISA試劑盒停止反響、比色:加50μL/孔停止液。ELISA試劑盒色彩變黃;用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm 處各孔的吸光值,陽(yáng)性反響的zui大稀釋度為待測(cè) 樣品的效價(jià)。


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