試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿、安排及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。注意事項(xiàng)及操作流程如下：
一、ELISA試劑盒操作流程：
1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚乙 烯板的反響孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗刷，下同)。
2、加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗刷。(一起做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗刷。
4、加底物液顯色：于各反響孔中參加暫時(shí)制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、停止反響：于各反響孔中參加2M硫 酸0.05ml。
6、成果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼調(diào)查成果：反響孔內(nèi)色彩越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反響為無色或極淺，根據(jù)所呈色彩的深淺，以“+”、“-”號(hào)表明。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)則的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。辦法二用于檢測(cè)不知道抗體的間接法：用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗刷3次。
加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷。(一起做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)
于反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗刷,zui終一遍用DDW洗刷。
二、ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：
1、一切樣品，洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理；
2、底物請(qǐng)避光保存；
3、濃洗刷液可能會(huì)有結(jié)晶分出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗刷時(shí)不影響成果；
4、請(qǐng)每次測(cè)定的一起做規(guī)范曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于規(guī)范品孔孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，核算時(shí)請(qǐng)zui終乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）；
5、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)成果斷定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)；
6、各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并常常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免實(shí)驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)刻控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，引薦運(yùn)用排槍加樣；
7、ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存；
8、封板膜只限一次性運(yùn)用，以避免穿插污染。
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