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ELISA試劑盒生物學反響

閱讀:130發布時間:2017-11-6

ELISA試劑盒曲線的低濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合,中低濃度部分可以用直線方程,中心部分可用對數方程,而中后段可用四參數。免疫檢測時規范點(可所以倍比稀釋的,也可以不是)濃度假設和相應的吸光度(OD)值假設可以出現直線當然是zui抱負的了,這時可以經過EXELL等利便的取得擬合曲線,進而推算出樣品的濃度值。 
ELISA試劑盒關于規范曲線的擬合辦法,直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用于ELISA試劑盒及其它生物學反響中的曲線擬合,但都只合用于曲線的一部分,有的合用于前半段,有的合用于后半段,有的合用于中心一段,而Logistic曲線則對曲線的悉數都有較好的合用性。在一個長的區間內,Logistic應該都能擬合得較為抱負。假設用來定量,S形曲線的中心段(較陡處)是比較好的,而兩真個平整部分計算誤差會大,有時甚至會很大。用于免疫檢測的所謂“規范曲線”真實稱為擬合曲線比較適宜。目前上zui盛行的免疫檢測擬合辦法是“四參數邏輯擬合”,用這種擬合辦法往往可以比較的反映濃度和吸光度的曲線,然后進一步比較的取得樣品中待測物質的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候可以有這么抱負的狀況,標品濃度和相應OD值往往是"S"型的曲線,這時就不能用直線擬合的辦法了,而對擬合辦法進行選擇就是必要的了。紐帶在于你的規范曲線做到了S形的哪一部分,你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部分。當然,假設用于定量,仍是在中心一段較好。但建模型是一回事,而用它來定量是另一回事。
ELISA試劑盒這些辦法固然沒有一種辦法可以通用,但也都可以用。但并不是說它就是的。事實上不僅是ELISA試劑盒,其它良多生物學反響都是S形曲線,也都可以用Logistic曲線擬合。
1、樣品的濃度等目標是依據規范曲線計算出來的,所以首要要把做規范曲線看作是比做正式試驗還要重要的一件事,不然后邊的試驗成果無從談起。
2、設置規范曲線樣品的規范濃度規模要有一個比較大的跨度,而且要能包含你所要檢測試驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在規范曲線濃度規模之內,包含上限和下限。而關于呈S型的規范曲線,盡量要使試驗樣品的濃度在中心斜度zui陡段,即曲線簡直成直線的規模內。
3、選用倍比稀釋法制造規范曲線中的規范樣品濃度,這樣就可以確保規范樣品的濃度不會出現較大的違背。
4、檢測規范樣品時,應按濃度遞加次序進行,以削減高濃度對低濃度的影響,進步性。
5、規范曲線的樣品數一般為7個點,但至少要確保有5個點。

 


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