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ELISA經常遇見的問題及解決辦法

閱讀:114發布時間:2017-12-18

一、挑選試劑
挑選質量優良的檢測試劑,嚴格依照試劑闡明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。二、加樣
可能原因:
1)血清或血漿標本別離欠好即進行加樣; 2)手藝操作中,加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等候時刻過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺起孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先天然寄存1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須運用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須當即倒置*混合5-10次,放置一段時刻后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要儲存,則置于-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板外表輕拭吸干。 4) 如果選用AT或其他全自動加樣,挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時,請分批操作。
三、 孵育
可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸騰,吸附于孔壁,難于清洗*; 2) 孵育時刻人為延長,導致非特異性結合緊附于反響孔周圍,難以清洗*。
解決辦法:
1) 貼封片或加蓋; 2) 按闡明步驟嚴格控制操作時刻。
四、洗板
可能原因:
1) 選用手藝洗板,孔與孔之間液體穿插。 2) 選用半自動洗板機洗板時,洗液量缺乏,導致洗板不*;洗板針阻塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。 3) 反響板過多形成洗板等候時刻長。
解決辦法:
1) 確保洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(挑選潔凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
五、顯色
可能原因:
1) 顯色劑制造后放置時刻過長或運用過期顯色劑; 2) 加顯色劑時濺起孔外形成液體回流。
解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前制造,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時堅持顯色劑不外流; 3) A、B液應防止觸摸金屬器械。

六、停止
可能原因如加停止液時發生較多氣泡,導致假陽性添加。所以在加停止液時應防止發生氣泡。
ELISA實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的使用,但操作中的各個環節對實驗的檢測效果影響較大,如不留意,有可能導致顯色不全、花板等成果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給同行帶來一些啟示,進步實驗質量。下面剖析ELISA實驗操作中可能影響成果的原因,并給出相應的解決辦法。


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