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試析ELIS試劑盒實(shí)驗(yàn)內(nèi)標(biāo)物的挑選及滿足條件

閱讀:211發(fā)布時(shí)間:2018-1-4

ELIS試劑盒將一個(gè)已知質(zhì)量,樣品中不含有雜質(zhì)的純物質(zhì),參加至待測樣品溶液中,以此純物質(zhì)的量為規(guī)范,比照測定待測組分的含量,該純物質(zhì)稱為內(nèi)標(biāo)物。
內(nèi)標(biāo)物需滿意下列要求:能*溶解于樣品中,且不與待測組分發(fā)作化學(xué)作用;峰位盡可能與待測組分的峰位接近,但能與待測組分*分隔(別離度R≥1.5)的純物質(zhì)。若得不到純品,有必要預(yù)先測定其準(zhǔn)確含量,且雜質(zhì)峰不得干擾待測組分峰。
測定的成果較為準(zhǔn)確,因?yàn)橥ㄟ^丈量內(nèi)標(biāo)物及被測組分的峰面積的相對(duì)值來進(jìn)行核算的,因而在一定程度上消除了操作條件等的改變所引起的差錯(cuò)。內(nèi)標(biāo)法的缺陷是操作程序較為費(fèi)事,每次剖析時(shí)內(nèi)標(biāo)物和試樣都要準(zhǔn)確稱量,有時(shí)尋覓適宜的內(nèi)標(biāo)物也有困難。 外標(biāo)法簡潔,但進(jìn)樣量要求非常準(zhǔn)確,要嚴(yán)厲控制在與規(guī)范物相同的操作條件下進(jìn)行,不然形成剖析差錯(cuò),得不到準(zhǔn)確的丈量成果。
ELIS試劑盒內(nèi)標(biāo)法是結(jié)合了峰面積歸一法和外標(biāo)法的長處的一種辦法,它在參加內(nèi)標(biāo)后,按峰面積歸一法的剖析辦法進(jìn)行剖析,這就防止了因?yàn)檫M(jìn)樣的一致性及樣品輕視效應(yīng)導(dǎo)致的偶然差錯(cuò),因而,它的剖析精密度也是比較高的,是氣相色譜的一種比較抱負(fù)的定量剖析辦法。它的缺點(diǎn)是前處理比較復(fù)雜,所花費(fèi)的時(shí)間也比較長,一起有必要要有適宜的標(biāo)樣及內(nèi)標(biāo)物才干進(jìn)行內(nèi)標(biāo)法定量剖析。關(guān)于內(nèi)標(biāo)法定量剖析來說,內(nèi)標(biāo)物的挑選是及其重要的。
它有必要滿意如下的條件:
① 內(nèi)標(biāo)物與被剖析物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)要類似;
② 內(nèi)標(biāo)物應(yīng)能*溶解于被測樣品(或溶劑)中,且不與被測樣品起化學(xué)反應(yīng);
③ 內(nèi)標(biāo)物的出峰方位應(yīng)該與被剖析物質(zhì)的出峰方位相近,且又不共溢出,意圖是為了防止GC的不穩(wěn)定性所形成的靈敏度的差異;
④ 挑選適宜的內(nèi)標(biāo)物參加量,使得內(nèi)標(biāo)物和被剖析物質(zhì)二者峰面積的匹配性大于75%,以免因?yàn)樗鼈兲幵诓煌憫?yīng)值區(qū)域而導(dǎo)致的靈敏度偏差。
① 將已知量的內(nèi)標(biāo)樣參加規(guī)范樣品,制成混合標(biāo)樣,并制造一系列的已知濃度的作業(yè)標(biāo)樣。混合標(biāo)樣中標(biāo)樣與內(nèi)標(biāo)樣的摩爾比不變。
② 注入色譜柱,以(標(biāo)樣峰面積/內(nèi)標(biāo)樣峰面積)為響應(yīng)值。
③ 依據(jù)響應(yīng)值與作業(yè)標(biāo)樣濃度之間存在的線性關(guān)系,即W=f×A,制成規(guī)范曲線。
④ 將已知量的內(nèi)標(biāo)樣參加不知道樣品,注入色譜柱,得到欲測組分的響應(yīng)值。
⑤ 依據(jù)已知的系數(shù)f,即可求出欲測組分的濃度。
ELIS試劑盒操作過程中樣品和內(nèi)標(biāo)是混合在一起注入色譜柱的,因而只需混合溶液中被測組分與內(nèi)標(biāo)的量的比值穩(wěn)定,上樣體積的改變不會(huì)影響影響定量成果。
內(nèi)標(biāo)法抵消了上樣體積,甚至活動(dòng)相、檢測器的影響,因而比外標(biāo)法準(zhǔn)確。

 


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