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細胞分離試劑盒的選擇方法及工作原理

閱讀:146發布時間:2018-3-5

怎樣選擇合適的細胞分離試劑盒
從樣品中別離提純同種細胞,是許多下游應用的要害重要的一步,分離得到的細胞能夠用于基因判定、細胞計數、生化剖析、蛋白別離、宿主-病原體互作以及細胞間相互作用等研究。一款適宜的細胞分離試劑盒能夠說是試驗成功的保證,因為只要取得正確的細胞,下游的分析成果才能夠更。當前,市面上有多種多樣的分離試劑盒可供挑選,它們的首要差異在于分離辦法和篩選標志。那么,怎么挑選zui合適自己的細胞分離試劑盒呢?期望這篇文章能為你供給一些幫助。 
正向選擇VS負向選擇 
細胞分離試劑盒的工作原理
細胞分離試劑盒的工作原理主要有兩種,正向選擇和負向選擇。正向選擇的試劑盒,使用與目標細胞直接結合的抗體來進行捕獲。這種抗體通常與磁珠相連,能夠利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-細胞復合物提取出來,再經過二抗將磁珠與目標細胞分開。負向選擇的試劑盒也選用相似的抗體包被磁珠,不過這種試劑盒是經過去掉樣品中的非目標細胞,來直接捕獲目標細胞。 
這兩種細胞分離試劑盒怎么取舍,首先取決于目標細胞的外表是不是具有特異性強的篩選標志。這樣的篩選標志能夠完成特異性的捕獲,防止所取得的細胞被非目標細胞污染。若是你的目標細胞剛好具有這樣的篩選標志,那么正向選擇的細胞分離試劑盒即是挑選。但如果目標細胞并不具有特異性強的篩選標準,那咱們還是選用負向選擇的細胞分離試劑盒。 
篩選標志的斷定 
經過PubMed等數據庫中的文獻,我們通常能夠斷定在目標細胞上表達的篩選標志。若是文獻中找不到合適自己的表面標志,我們還能夠用目標細胞的DNA序列進行BLAST查找。BLAST查找結果會顯示,目標細胞上能夠表達的表面標志,在此基礎上能夠選擇用于捕獲的細胞外表蛋白。舉例來說,對一個T細胞進行BLAST查找,結果會顯示該細胞是不是表達CD4或CD8。在得知目標細胞表達CD4之后,我們能夠先對樣品進行一個免疫試驗(如ELISA),以查驗BLAST查找的成果。一旦證明目標細胞確實表達CD4,我們就能夠用相應試劑盒來挑選CD4陽性的T細胞。 
一般流程 
關于一個旨在別離CD4陽性T細胞的試劑盒來說,操作流程首要有以下幾步。首先,將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠一同孵育,使抗體與CD4+ T細胞結合。然后洗去不需要的非目標細胞(即不表達CD4的細胞),留下磁珠-抗體-細胞復合物。將上述復合物與能結合anti-CD4抗體的二抗一同孵育,二抗就會代替CD4+T細胞,形成磁珠-抗體-二抗復合物。我們能可以磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復合物,而所有的CD4+細胞留在上清中。zui后,只需要將上清轉移就能可以進行現有研究了。 


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