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上海莼試生物技術有限公司
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人源細胞爬片的免疫熒光步驟

時間:2017/4/27閱讀:254
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1.取出人源細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養皿里,PBS洗三遍。

注意:有的時候作的細胞爬片可能比較小,因此夾取的時候要小心,注意 反正面,放在皿里洗比較方便,避免了來回夾取,另外洗的時候加PBS不要太沖,不要細胞沖下來。洗的時候我都是多加PBS,稍晃一下就倒掉,沒有等5分鐘或10分鐘。

2. 4%冷的多聚甲醛固定20分鐘,PBS洗三遍。

3. 0.2%Triton X-100通透10分鐘,PBS洗三遍。

4. 人源細胞與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘,PBS洗三遍。

5. 一抗4度濕盒內過夜,也可37度2小時,感覺前者效果好,PBS洗三遍。

6.二抗室溫2小時(避光),或者37度1半小時,PBS洗三遍。

7.用DAPI染核,然后直接照熒光片。

8.蒸餾水洗掉PBS,甘油封片,指甲油封片子的四周,因為甘油不象樹脂那樣會干,所以不用指甲油封的話會弄的一塌糊涂。

建議:1.人源細胞還是染完之后沒有封片前直接照一些,因為有的時候可能封片會出現問題,再想照反而沒有了,另外不要拖太長時間,熒光會崔滅的。2.熒光的片子一定要避光保存,保存的好的話,過一段時間仍然能照出很好的片子。3.二抗用之前一定離心,不然有的時候有那種沉淀,在片子上就是一個很大的非特異性熒光光點,非常難看。

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