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上海莼試生物技術有限公司
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干細胞解凍培養技巧分析

時間:2017/6/8閱讀:507
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說明
1.經過冷凍保存后的干細胞,其生存率會下降,冷凍時之冷卻速度,保存溫度,解凍時升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類、濃度等都可影響細胞存活率。
2. 一般而言,4℃以下慢慢地冷凍,保存于液態氮中(-196℃)。
3. 37℃快速解凍。
4.保護劑(抗凍劑):添加甘油 (glycerol) ( I0 %左右 ) 或dimethy1sulfoxide (DMSO) ( 5- 10% ) 。
5.有些細胞如果采用上述的方法時,無法得到高的存活率。此時,則必需考慮可能傷害細胞的機制,添加劑之作用等而來找出適當的條件來修正。

材料 :
1.增殖期之細胞 (9成滿),培養于培養皿中數個。
2.冷凍用培養基(2倍) : 培養基內加入三倍血清及15% DMSO,保存在冰箱中。
3. 冷凍管、保利龍制容器、鋁制ample支持棒。

步驟:
1.準備2 x 107cells/ml的干細胞懸浮液。
2.冷凍用培養基(2倍) :以微溫水溶解DMSO,在培養基中混合為15% (v/v)。這是DMSO的二倍濃度之溶液。必須在進行實驗前在行配制,配好后放在冰箱中,使用量必須和細胞懸浮液的量相等;使用時維持在4℃。
3.分裝: 在冷凍管管中分別加0.5ml (1/2冷凍管體積)冷凍用培養基(2倍)及2 x 10(7次方)cells/ml的細胞懸浮液;等量混合。將蓋子扭緊后,在管中部貼上膠帶密封。
4.記載卷標 : 用抗凍marker pen在冷凍管上寫明細胞名稱、代數、冷凍的年,月,日等所需要的項目。
5.放進冷卻的保利龍容器中,而在- 80℃的超低溫槽中放置一個晚上。
6.干細胞放進液態氮容器中及保存 : 在支持棒上裝上冷凍管,迅速地放進容器內。

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