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上海莼試生物技術有限公司
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人源細胞培養常用試劑

時間:2017/7/27閱讀:468
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人源細胞培養常用試劑
一、 PBS 磷酸緩沖鹽溶液(一般作為溶劑,起溶解保護試劑的作用)

PBS 1L配方pH7.4:磷酸二氫鉀(KH2PO4):0.27g,

*(Na2HPO4):1.42g,

加去離子水約800mL充分攪拌溶解,然后加入濃鹽酸調pH至7.4,

zui后定容到1L

高溫高壓滅菌后置于4攝氏度冰箱保存待用。

(一般情況下,現配現用,易變質暴露在空氣中)

二、 細胞消化液

0.25%*-0.02%EDTA的配制

配方:100ml PBS,0.25g*

步驟:

1、先配100mlPBS

2、稱*0.25g

3、加入PBS中,低速攪拌 <4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中(儲存-20攝氏度冰箱中,使用保存4攝氏度)

4、調PH7.4

5、仍在冰浴中

6過濾,分裝,-20℃保存,4℃短期內用完

Tip:低速很重要,機械攪拌對酶是一種沖擊,如果起沫,酶就變性了。低溫,防止酶失活

對難消化的人源細胞:在上述配方中,加入0.02g的EDTA(0.02%)

Tip:因為EDTA可以絡合Ca2 ,增加消化效力

注意事項:

1、*是0.25%,這是質量體積比,就是說0.25g*溶于100ml PBS,注意,盡量不要用水來溶,因為要保持滲透壓。

2、EDTA的工作液溶度是0.02%-0.1%,根據細胞消化的難易程度自己調整。EDTA并不是必須的,容易消化的細胞可不加。EDTA對細胞貼壁性有影響,因此使用時要甚重。如果影響貼壁,但消化時必須要用,那么在用*培養基終止消化后,可離心棄上清,再加*培養基培養,可去除EDTA。如果對貼壁沒影響,那么可不離心。

3、EDTA的濃度也是質量體積比。和*一起溶于PBS。

4、注意,血清可終止*的作用,但不能終止EDTA的作用,對有些細胞來說,終止消化后的離心是必要的。

5、*和EDTA在pH 為8左右的時候zui易溶解,在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調至8,注意,*可使溶液變酸,所以要邊溶邊測pH,隨時調整。注意,不可加過量NaOH,否則過堿,細胞會*。

6、*EDTA相對比較難溶,可用磁力攪拌器,或放入4度冰箱過夜,待溶解后過濾除菌。

7、可配2-3乘的*,這樣比較節約時間和濾器,用的時候對上滅菌PBS即可。

8、儲存液放在-20度冰箱凍存,使用液放在4度,用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴,因為這樣會讓*很快失效,使用前放在室溫下一會,因為加的量很少,所以一般不會凍壞細胞。

9、消化時,向培養瓶中加入適量*,個人經驗,一般10cm培養皿加入0.5ml足已,加入后,立刻搖晃培養皿,使*鋪滿,一旦鋪滿,立刻用*吸去多余的*,再放入37度培養箱消化。

10、注意,過量的*對細胞是有害的,而EDTA過多也會影響貼壁,所以沒必要把細胞泡在*里面消化。

11、*37攝氏度消化效果,低于37度也有消化能力,有些容易消化的細胞在消化時甚至不需要放入培養箱。注意,不可消化過久。

三、細胞培養基

人臍靜脈內皮細胞HUVEC細胞

培養基RPMI 1640 培養基/DMEM培養基

肝癌細胞HepG-2細胞培養基

人源細胞DMEM培養液(含100 U/ml-*、100 U/ml*、10%新生牛血清

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