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上海莼試生物技術有限公司
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人源細胞傳代方法

時間:2017/12/21閱讀:184
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1.從培養容器中吸出用過的人源細胞并丟棄;

2.用不含鈣、鎂的*沖洗細胞(每10cm2培養表面積約2mL溶液);從與貼壁細胞層相對的容器一側輕輕加入沖洗液,以避免攪動細胞層,前后搖晃容器數次(注:沖洗步驟可去除可能抑制解離劑作用的少量血清、鈣和鎂);

3.從培養容器中吸出沖洗液并丟棄,向培養瓶中加入預熱的解離劑;試劑量應足以覆蓋細胞層(每10cm2大約0.5mL);

4.輕輕搖晃容器,使試劑*覆蓋細胞層;吸出多余解離試劑,T25細胞培養瓶留200ul左右即可;

5.將培養容器在室溫下孵育約2分鐘(請注意實際孵育時間根據所用細胞系不同而有所差異);

6.在顯微鏡下觀察細胞解離情況;如果解離程度未達90%,可將孵育時間延長幾分鐘,每30秒鐘檢查一次解離情況;也可輕輕拍打培養容器以加快細胞解離;

7.細胞解離程度大于等于90%時,傾斜培養容器,使細胞上液體盡快流盡;加入所用解離劑兩倍體積的預熱*生長培養基;吹打細胞層表面數次,使培養基分散;

8.將細胞轉移到15mL無菌離心管中,以200×g的離心力離心3-5分鐘(請注意離心速度和時間依細胞種類不同而有所差異);

9.用zui少體積的預熱*生長培養基重新懸浮細胞沉淀,將人源細胞懸液按照推薦比例稀釋,并將適量體積的細胞懸液轉移到新的細胞培養容器中,把細胞放回培養箱(注:如果使用培養瓶,將其放入培養箱前應將瓶蓋旋松,以便進行充分的氣體交換,除非您使用的是通氣式培養瓶和透氣性瓶蓋)。
20mg/支    42553-65-1    Crocin    西紅花苷
20mg/支    94238-00-3    Crocin I    西紅花苷I
20mg/支    55750-84-0    Crocin II    西紅花苷II
20mg/支    480-16-0;654055-01-3    Morin hydrate    桑色素
20mg/支    77-95-2    D-(−)-Quinic acid    D-(-)-奎寧酸
20mg/支    2415-24-9    Catalpol    梓醇
20mg/支    60-81-1    Phlorizin    根皮苷
20mg/支    5289-74-7    Ecdysterone    蛻皮激素
20mg/支    23513-14-6    6-gingerol    6-姜酚
20mg/支    4431-01-0; 81944-09-4    Ligustilide    蒿本內酯
5mg/支    19130-96-2    1-Deoxynojirimycin    脫氧野尻霉素
20mg/支    546-43-0    Alantolactone    土木香內酯
人源細胞

 

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