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上海莼試生物技術有限公司
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干細胞不貼壁的原因和解決方法

時間:2018/3/27閱讀:387
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干細胞培養過程中容易出現這樣或那樣的問題,這些問題都是在細胞生長方面來說,比如細胞的不貼壁、生長緩慢、生長不好,甚至死亡的原因,這些問題使得細胞研究者很是頭疼,下面是針對這些問題的原因和解決方法:
一、培養細胞不貼壁
可能原因: 
1.*消化過度 ;
2.支原體污染 ;
3.培養基pH值過堿(NaHCO3分解);               
4.細胞老化 ;
5.接種細胞起始濃度太低或太高 。
解決方法: 
1.縮短*消化時間或降低*濃度; 
2.分離培養物,檢測支原體。清潔支架或培養箱。如發現支原體污染,丟棄培養物;
3.使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2 ;
4.啟用新的保種細胞 ;
5.調節接種細胞濃度。
二、懸浮細胞成簇
可能原因: 
1.培養液中含鈣、鎂離子 ;
2.支原體污染;
3.蛋白酶過度消化使得細胞裂解;
4.DNA污染 。
解決方法: 
1.用無鈣鎂*洗滌細胞,輕巧吹吸細胞獲得單細胞懸液;
2.分離培養物,檢測支原體;
3.用DNaseI處理細胞。
三、培養細胞生長緩慢
可能原因:
1.由于更換不同培養液或血清; 
2.培養液中一些細胞生長必需成分如*或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞; 
3.培養物中有少量細菌或真菌污染; 
4.試劑保存不當; 
5.接種細胞起始濃度太低; 
6.細胞已老化; 
7.支原體污染 。
解決方法: 
1.比較新培養液與原培養液成分,比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗,讓細胞逐漸適應新培養液; 
2.換入新鮮配置培養液,或補加*及生長因子;
3.用無抗生素培養液培養,如發現污染,丟棄培養物;
4.血清需保存在-10到-20℃。培養液需在2-8℃避光保存。含血清*培養液在2-8℃保存,需在1周內用完;
1.增加接種細胞起始濃度; 
2.換用新的保種細胞; 
3.分離培養物,檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染,丟棄培養物。
四、培養細胞生長不好
可能原因:
1.細胞本身的狀態
細胞傳代次數多,細胞老化;
細胞的接種量:接種量過低,細胞生長緩慢;
細胞傳代時間過晚:細胞中毒,影響傳代后的細胞生長;
*消化時間過長或過短:時間過長,細胞死亡;時間過短,細胞未*分離而成團,細胞死亡;
細胞的凍存與復蘇:慢凍速融。
2.污染
支原體污染;
霉菌污染。
3.培養基或血清
更換血清或培養基之前未進行驗證;
選擇的培養基是否合適;
培養基配制是否準確無誤。
4.培養環境
CO2供應是否正常;
培養箱或搖床溫度控制是否正確。
解決方法:
根據以上四個方面的可能原因,做出針對性的解決方案
1.注意細胞的本身狀態:如傳代次數、接種量等;
2.避免產生污染(用正規、合法、可溯源的血清);
3.要用合適的血清或培養基,經過驗證;
4.注意實驗室的環境。
五、培養干細胞死亡
可能原因: 
1.培養箱內無CO2; 
2.培養箱內溫度波動太大; 
3.細胞凍存或復蘇過程中損傷; 
4.培養液滲透壓不正確; 
5.培養液中有毒代謝產物堆積 。
解決方法: 
1.檢測培養箱內CO2; 
2.檢查培養箱內溫度; 
3.取新的保存細胞種; 
4.檢測培養液滲透壓; 
5.換入新鮮培養液。
Polyvinyl Acetate Dispersion    聚乙烯乙酸酯分散體標準品    9003-20-7     1g
    狹葉紫錐菊提取物標準品    90028-20-9    1g
Papain    木瓜酶標準品    9001-73-4     1g
Xylitol     *標準品    87-99-0     1g
Tartaric Acid     左旋酒石酸標準品    87-69-4     1g
    紫錐菊粉末提取物標準品    84696-11-7    1g
Fish Oil     魚油標準品    8016-13-5     1g
Palm Oil (AS)    棕櫚油標準品    8002-75-3     1g
Paraffin     石蠟標準品    8002-74-2     1g
干細胞

 

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