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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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穩(wěn)定ATCC細(xì)胞的3大方法!

時間:2018/5/17閱讀:996
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*,ATCC細(xì)胞使用混合穩(wěn)定株可以獲得多個不同的單克隆穩(wěn)定細(xì)胞株。因為穩(wěn)定整合往往伴隨著插入失活宿主內(nèi)源基因,所以實驗時通過使用混合穩(wěn)定靠譜的細(xì)胞株,或者對多個單克隆穩(wěn)定細(xì)胞株進(jìn)行比較,可以幫助研究人員獲得更的實驗數(shù)據(jù)。篩選穩(wěn)定細(xì)胞株主要有三類方法:

1:單克隆環(huán)法

此類方法多用于整合率低的轉(zhuǎn)染方法或者需要得到單克隆細(xì)胞株的實驗。其優(yōu)點在于工作量小,只需將轉(zhuǎn)染或者病毒載體感染后的細(xì)胞按照一定的細(xì)胞密度轉(zhuǎn)移至新皿中,并使用合適的藥物進(jìn)行篩選,zui后在克隆環(huán)的幫助下對單克隆細(xì)胞株進(jìn)行挑選,并在新皿中完成擴(kuò)增。

2:96孔單克隆稀釋法

此類方法同樣多用于整合率低的轉(zhuǎn)染方法或者需要得到單克隆細(xì)胞株以及篩選懸浮細(xì)胞穩(wěn)定株的實驗。其優(yōu)點在于,理論上可以得到非常均一的單克隆,同時可以篩選懸浮細(xì)胞穩(wěn)定株。其缺點在于,工作量比較大。

3:逆轉(zhuǎn)錄病毒混合克隆制備法

此類方法適用于需要制備混合穩(wěn)定細(xì)胞株。優(yōu)點在于可以在短時間內(nèi)獲得穩(wěn)定細(xì)胞株,同時也可以隨時將細(xì)胞稀釋轉(zhuǎn)移至新皿中獲得單克隆細(xì)胞株。傾向于整合于轉(zhuǎn)錄起始位點附近的,容易造成下游基因的激活;而整合于轉(zhuǎn)錄活躍基因內(nèi)的,容易導(dǎo)致整合區(qū)基因的插入失活。

總而言之,對于需要對ATCC細(xì)胞密度和藥物濃度繪制致死曲線并選取合適的細(xì)胞密度和藥物濃度進(jìn)行篩選,一些細(xì)小的密度和濃度差別都會影響獲取均一的單克隆細(xì)胞株,影響獲取的克隆不純,國內(nèi)的細(xì)胞株含有非整合的細(xì)胞。穩(wěn)定整合的細(xì)胞在這樣一類混合細(xì)胞中,不會失去生長優(yōu)勢。

 CA I 乙肝病毒X蛋白抗體(N端)

 CA II 乙二醛酶1抗體

 CA IX 胰腺衍生因子抗體

 CA125 胰腺衍生因子抗體

 CA153/MUC1 胰腺α*抗體

 CA153/MUC1 胰十二指腸同源異型盒基因抗體

 CA15-3/Muc1/CD227 胰高血糖素樣肽-2抗體

 CA50 胰高血糖素樣肽-2抗體

 c-Abl 胰高血糖素樣肽-1受體抗體
ATCC細(xì)胞

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