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細(xì)胞免疫熒光簡單實(shí)驗(yàn)步驟

時(shí)間:2017-4-27閱讀:137
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細(xì)胞免疫熒光簡單實(shí)驗(yàn)步驟如下:

1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小時(shí).

2.-20度甲醇固定20分鐘后,自然、干燥 10分鐘

3.PBS洗凈:3min*3

4.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS

5.PBS洗凈:2*5min

6.羊血清封閉:37度,20分鐘

7.一抗,4度過夜,一般要大于18小時(shí)或者37度 1-2小時(shí)

8.4度 PBS洗凈,3min*5次

9.二抗 37度小于一小時(shí)

10.37度 PBS洗凈,3*5min

涼干封片(封閉液PH8.5)

不管采用何種方法,在使用PBS緩沖液漂洗時(shí),都要漂洗干凈并且要測下pH值,可以使用PBS多清洗幾次,也可以延長PBS清洗時(shí)間,如果結(jié)果背景較高可以延長漂洗的次數(shù)和時(shí)間。

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