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免疫細胞幾種目前較為常用和*的固定劑

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大多數(shù)神經(jīng)激素、肽類物質(zhì)為水溶性,在用于免疫細胞化學研究之前,常需固定。但肽類和蛋白質(zhì)物理、化學性質(zhì)不同,因而對不同的固定方法或固定劑的反應(yīng)也不盡相同。某些固定劑甚至可同時破壞和/或保護同一抗原的不同抗原決定簇。因此,在進行免疫細胞化學研究之前,很有必要了解所要研究的物質(zhì)(蛋白質(zhì)或肽類)的化學性質(zhì),并根據(jù)需要來選擇適宜的固定劑(或固定方法)以及改進固定條件。 
1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸緩沖液(pH7.3) 
試劑:多聚甲醛 40g 
0.1mol/L磷酸緩沖液 至1000ml 
配制方法:稱取40g多聚甲醛,置于三角燒瓶中,加入500~800ml 0.1mol/L磷酸緩沖液(Phosphate Buffer以下簡稱PB),加熱至60℃左右,持續(xù)攪拌(或磁力攪拌)使粉末*溶解,通常需滴加少許1n NaOH才能使溶液清亮,zui后補足0.1mol/L的PB于1000ml,充分混勻。 
該固定劑較適于光鏡免疫細胞化學研究,是動物經(jīng)灌注固定取材后,繼續(xù)浸泡固定2~24h。另外,該固定劑較為溫和,適于組織標本的較*保存。 
2.4%多聚甲醛-*/氫氧化鈉 
試劑:A液:多聚甲醛 40g 
蒸餾水 400ml 
B液:Na2HPO4·2H2O 16.88g 
蒸餾水 300ml 
C液:NaOH 3.86g 
蒸餾水 200m 
配制方法:A液在500ml的三角燒瓶中配制(方法同前),至多聚甲醛*溶解后冷卻待用。注意,在溶解多聚甲醛時,要盡量避免吸入氣體或濺入眼內(nèi)。B液和C液配制好后,將B液倒入C液中,混合后再加入A液,以1n NaOH或1N HCl 將pH調(diào)至7.2~7.4,zui后,補充蒸餾水至1000ml充分混合,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?nbsp;
該固定劑適于光鏡和電鏡免疫細胞化學研究,用于免疫電鏡時,加入少量新鮮配制的戊二醛,使其終濃度為0.5%~1%。該固定劑較溫和,適于組織的*保存。組織標本于該固定液中,4℃冰箱保存數(shù)月仍可獲得滿意的染色效果。 
3.Bouin’s液及改良Bouin’s液 
試劑:飽和苦味酸 
40%甲醛 250ml 
冰醋酸 50ml 
配制方法:先將飽苦味酸過濾,加入甲醛(有沉淀者禁用),zui后加入冰醋酸,混合后存于4℃冰箱中備用。冰醋酸在臨用前加入。改良Bouin’s液即不加冰醋酸。 
該固定液為組織學、病理學常用固定劑這一,對組織的穿透力較強,固定較好,結(jié)構(gòu)完整。但因偏酸(pH為3~3.5),對抗原有一定損害,且組織收縮較明顯,故不適于組織標本的*保存。此外,操作時,應(yīng)避免吸入或與皮膚接觸。 
4.Zamboni’s(Stefanini’s)液 
試劑:多聚甲醛 20g 
飽和苦味酸 150ml 
Karasson-Schwlt’s PB 至1000ml 
配制方法:稱取多聚甲醛20g,加入飽和苦味酸150ml,加熱至60℃左右,持續(xù)攪拌使充分溶解、過濾、冷卻后,加Karasson-Schwlt’s PB至1000ml充分混合(Karasson –Schwlt’s磷酸緩沖液的配制配制方法見后)。 
該固定液適于電鏡免疫細胞化學,對超微結(jié)構(gòu)的保存較純甲醛為優(yōu),也適于光鏡免疫細胞化學研究,為實驗室常用固定劑之一。我們在應(yīng)用中,常采用2.5%的多聚甲醛和30%的飽和苦味酸,以增加其對組織的穿透力和固定效果,保存更多的組織抗原。固定時間為6~18h。 
5.PLP液 PLP液即過碘酸鹽-賴氨酸-多聚甲醛固定液(Periodate-Lysine-paraform-alde-h(huán)yde fixative) 
試劑:過碘酸鈉 
賴氨酸鹽酸鹽(或*): 
多聚甲醛 
蒸餾水

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