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小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞凍存和復(fù)蘇方法

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小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞凍存:
1.細(xì)胞:選對數(shù)生*細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時前換液一次。
2.計數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計數(shù),令細(xì)胞密度達5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。
3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。
4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。
5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時可浸入藍色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細(xì)胞名稱,凍存日期,以便日后查找。
小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞復(fù)蘇方法
1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。
3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液,裝入離心管中,再補加10ml培養(yǎng)液,吹打使細(xì)胞懸浮。
4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

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