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上海莼試生物技術有限公司
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其他細胞培養(yǎng)用液

時間:2017-7-24閱讀:135
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一、人源細胞*(balanced salt solution,BSS):主要是由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。主要用于取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、配制其他試劑等。zui簡單的BSS是Ringer。D-Hank"s與Hank"s的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+、Mg2+,因此D-Hank"s常用于配制*溶液。Earle平衡液含有較高的NaHCO3(2.2g/L),適合于5%CO2的培養(yǎng)條件,Hank"s平衡液僅含有0.35g/L NaHCO3,不能用于5%CO2的環(huán)境,若放入CO2培養(yǎng)相,溶液將迅速變酸,使用時應注意。
配制溶液應使用雙蒸水或去離子水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+,應當首先溶解這些成分。配好的*可以過濾除菌或高溫滅菌。

二、消化液:取材進行原代培養(yǎng)時常常需要將組織塊消化解離形成細胞懸液,傳代培養(yǎng)時也需要將貼壁細胞從瓶壁上消化下來,常用的消化液有*(Trypsin)溶液和edta溶液,有時也用膠原酶(collagenase)溶液。
 

1.EDTA溶液:EDTA溶液也常用來解離細胞,它的作用機制是破壞細胞間的連接。對于一些貼壁特別牢固的細胞,還可以用EDTA和*的混合液進行消化。EDTA溶液的使用濃度為0.02%,配制時應加堿助溶,配制后可過濾除菌,也可高溫消毒滅菌。

2.*:膠原酶在上皮類細胞原代培養(yǎng)時經(jīng)常使用,膠原酶作用的對象是膠原組織,因此不容易對細胞產生損傷。膠原酶的使用濃度為0.1-0.3mg/L或200000U/L,人源細胞作用的pH為6.5。膠原酶不受Ca2+、Mg2+及血清的抑制,配制時可用PBS。

3.*溶液:*活性可用消化酪蛋白的能力表示,常見有1:125和1:250,即一份*可消化125或250份酪蛋白。組織培養(yǎng)用*溶液一般配制成0.1-0.25%濃度,配制時要用不含Ca2+、Mg2+及血清的*(如前面的D-Hank"s),因為這些物質會對*產生抑制作用。*作用及溶解的pH是8-9,配制*溶液應將液體調至pH8左右,充分溶解,過濾除菌。過濾后可以再調只pH7.5,也可不調。
使用細胞清洗液配制*消化液:含0.5%*的細胞清洗液(100ml細胞清洗液加0.5g*),過濾除菌,分裝于4度保存。
酪胨-*-吐溫20液體培養(yǎng)基基礎    *    250(g)
腸球菌培養(yǎng)基基礎(疊氮鈉-結晶紫-七葉苷瓊脂)    *    250(g)
擬桿菌選擇性培養(yǎng)基基礎(改良GAM瓊脂基礎)    *    250(g)
去氧膽酸鹽檸檬酸鹽瓊脂    *    250(g)
改良Y培養(yǎng)基    *    250(g)
梭菌*    *    250(g)
R2A 瓊脂    *    250(g)
厭氧液體培養(yǎng)基    *    250(g)
厭氧瓊脂    *    250(g)
人源細胞

 

 

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