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腫瘤細(xì)胞的傳染出新招啦

時(shí)間:2018-1-15閱讀:75
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盡管新腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑在不斷涌現(xiàn),一代更比一代強(qiáng),但面對(duì)原代細(xì)胞,它們的效果仍然不盡如人意。于是,日本名古屋大學(xué)的研究人員做了一個(gè)大膽的嘗試,將兩種的轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合使用,竟然取得了不錯(cuò)的效果。下面,我們就來(lái)看看他們是怎么做的。

目前,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑被廣泛使用,因?yàn)樗鼈兪褂煤?jiǎn)便,也不需要特殊設(shè)備。不過(guò),這些試劑在原代細(xì)胞上的轉(zhuǎn)染效果不佳。為了解決這個(gè)問(wèn)題,研究人員決定組合使用Lipofectamine LTX和FuGENE HD這兩種試劑,來(lái)轉(zhuǎn)染原代成纖維細(xì)胞和成肝細(xì)胞。

研究人員從小鼠胚胎中分別獲取了原代成纖維細(xì)胞和成肝細(xì)胞。他們將pRL-CMV質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi),以檢驗(yàn)轉(zhuǎn)染效率。pRL-CMV來(lái)自Promega公司,它在CMV啟動(dòng)子的控制下組成型表達(dá)海腎熒光素酶。因此,利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)可以確定轉(zhuǎn)染效率。

當(dāng)然,轉(zhuǎn)染效率的提高也不能以細(xì)胞死亡為代價(jià)。于是,研究人員又利用Promega的CellTiter-Glo細(xì)胞活力檢測(cè)系統(tǒng)來(lái)評(píng)估細(xì)胞活力。他們通過(guò)光度計(jì)測(cè)量?jī)x來(lái)測(cè)定相對(duì)光強(qiáng)度(RLU),以反映熒光素酶活性或細(xì)胞活力。

研究結(jié)果表明,Lipofectamine LTX和FuGENE HD的結(jié)合使用提高了原代成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。另外,Lipofectamine LTX在購(gòu)買時(shí)還附帶了一種Plus試劑。根據(jù)說(shuō)明,在轉(zhuǎn)染過(guò)程中添加Plus試劑可提高轉(zhuǎn)染效率。研究人員也嘗試著添加Plus試劑,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率的確有上調(diào)。

之后,研究人員又將這種組合應(yīng)用在原代成肝細(xì)胞上。他們發(fā)現(xiàn),盡管轉(zhuǎn)染效率有所提高,但是不如原代成纖維細(xì)胞那么顯著。此外,與單用FuGENE HD相比,試劑組合的使用降低了細(xì)胞活力。為此,他們優(yōu)化了實(shí)驗(yàn),提高了細(xì)胞密度,使得結(jié)果改善。

作者指出,腫瘤細(xì)胞脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移取決于多個(gè)因素,如脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物的凈電荷和結(jié)構(gòu)。他們推測(cè),Lipofectamine LTX和FuGENE HD的組合也許優(yōu)化了復(fù)合物的形成,故提高了原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。不過(guò)。這些試劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)并未公布,因此機(jī)制仍無(wú)法獲知。
20mg/支    Compound K    人參皂苷CK    HPLC≥98%        
20mg/支    (−)-Gallocatechin gallate;GC    沒(méi)食子兒茶素    HPLC≥98%       
20mg/支    (−)-Catechin gallate;CG    兒茶素沒(méi)食子酸酯    HPLC≥98%     
0001-9503    對(duì)照品    醋酸*    含量測(cè)定        50mg
100002-199504    對(duì)照品    *    檢查        500mg
100004-198102    對(duì)照品    *    含量測(cè)定        50mg
0005-9402    對(duì)照品    苯丁酸氮芥    含量測(cè)定        50mg
100006-200504    對(duì)照品    苯甲酸雌二醇    含量測(cè)定        100mg
100008-199404    對(duì)照品    *    含量測(cè)定        50mg
100010-200507    對(duì)照品    *    含量測(cè)定        50mg
腫瘤細(xì)胞

 

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