目前,血清仍是人源細胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng),待細胞生長旺盛以后,再換成無血清培養(yǎng)液。細胞轉入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。
為了使細胞適應無血清培養(yǎng),關鍵的是將所培養(yǎng)細胞:
1.處于對數(shù)生長中期
2.>90% 活細胞率
3.適應時以較高的起始細胞接種
以下是細胞適應無血清培養(yǎng)基的使用方法:
*、直接適應——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中。一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應無血清培養(yǎng)基。
第二、連續(xù)適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中,與直接適應相比較,連續(xù)適應趨向對于細胞更加溫和一些。
(1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基:25%SFM 混合培養(yǎng)基中,傳代培養(yǎng)。
(2)當細胞密度>5×105細胞/ml時,以2×105到3×105細胞/ml細胞密度,在有血清培養(yǎng)基:SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(3)以2×106到3×106細胞/ml細胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。 (4)當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(5)每隔3到5天,當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。
在實驗后這些人源細胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細胞能夠*培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細胞轉入無血清培養(yǎng)之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細胞的特性不發(fā)生變化。
200mg Isradipine 75695-93-1 依拉地平標準品
200mg Isoxsuprine Hydrochloride 579-56-6 異舒普林鹽酸鹽標準品
200mg Isotretinoin 4759-48-2 *標準品
200mg Isopropamide Iodide 71-81-8 異丙碘胺標準品
200mg Isoniazid 54-85-3 雷米封標準品
200mg Isometheptene Mucate 7492-31-1 半乳糖二酸異美汀標準品
200mg Isomalt 64519-82-0 異麥芽酮糖醇標準品
200mg Isoflupredone Acetate 338-98-7 乙酸異氟潑尼龍標準品
200mg Isocarboxazid 59-63-2 異卡波肼標準品
人源細胞
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