液相色譜儀流動相的要求有哪些?
液相色譜流動相是液體,對組分有親合力,并參與固定相對組分的競爭,正確選擇流動相溶劑直接影響樣品組分的分離。
一、溶劑對于待測樣品必須具有合適的極性和良好的選擇性。
二、溶劑與檢測器匹配:
對于紫外吸收檢測器,不能用對紫外光有吸收的溶劑。
對于示差折光檢測器,要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相,以達到高靈敏度。
三、高純度:
由于液相色譜靈敏度高,對流動相溶劑的純度要求高。不純的溶劑會引起基線不穩(wěn)或產(chǎn)生假峰。
四、化學穩(wěn)定性好。
五、粘度適中:
若溶劑粘度高,會增高壓力,不利于分離。常用的低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等。
粘度過低的溶劑不宜采用,如戊烷等,它們?nèi)菀自谏V柱和檢測器內(nèi)形成氣泡,影響分離。
液相色譜儀的梯度洗脫是指在同一個色譜分析周期中,按一定程度不斷改變流動相的濃度配比。梯度洗脫又稱梯度淋洗或程序洗脫。
一、梯度洗脫類型:
1、高壓梯度:采用兩臺高壓輸液泵,分別按設定的比例輸送A和B兩種溶液至混合器,混合器在泵之后,兩種溶液在高壓狀態(tài)下混合。
2、低壓梯度:只需一臺高壓輸液泵,比例閥在泵之前,溶液在常壓(低壓)下混合。
二、梯度洗脫實質(zhì):
通過不斷地變化流動相的配比和極性來調(diào)整混合樣品中各組分的k值,使所有色譜帶都以平均k值通過液相色譜儀色譜柱。梯度洗脫在液相色譜儀中所起的作用相當于氣相色譜儀中的程序升溫,所不同的是,在梯度洗脫中樣品k值的變化是通過流動相的極性、PH值和離子強度改變來實現(xiàn)的,而不是通過改變溫度(溫度程序)來實現(xiàn)。
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