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賽默飛色譜及痕量元素分析

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戴安高效液相色譜儀的正確使用指南

閱讀:646      發(fā)布時(shí)間:2024-11-25
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  戴安高效液相色譜儀的正確使用指南可以歸納為以下幾個(gè)步驟:
  一、開(kāi)機(jī)前準(zhǔn)備
  1.溶劑和樣品處理:
  使用HPLC前,須采用專用過(guò)濾系統(tǒng)對(duì)溶劑和樣品進(jìn)行過(guò)濾和脫氣。所用溶劑等級(jí)應(yīng)為色譜純,水應(yīng)為超純水。
  密封圈清洗溶液為1:9甲醇/水,每次使用前更換。
  樣品必須經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾,流動(dòng)相也必須經(jīng)過(guò)0.45μm過(guò)濾(色譜純除外)并脫氣。
  2.檢查儀器狀態(tài):
  確保儀器各部件連接緊密,無(wú)松動(dòng)或漏液現(xiàn)象。
  檢查蠕動(dòng)泵清洗瓶中的甲醇是否充足,如不足需及時(shí)更換。
  二、開(kāi)機(jī)與聯(lián)機(jī)
  1.開(kāi)機(jī)順序:
  按下穩(wěn)壓電源工作電源開(kāi)關(guān)鍵至“ON”狀態(tài)。
  依次接通P680型輸液泵、自動(dòng)進(jìn)樣器(如ASI-100)、柱溫箱、檢測(cè)器(如紫外檢測(cè)器)、電腦。
  先運(yùn)行變色龍工作站,再打開(kāi)儀器電源,并進(jìn)行聯(lián)機(jī)。
  2.儀器初始化:
  確認(rèn)各模塊的“connected”圖標(biāo)均為綠色,表示儀器與工作站已正確連接。
  根據(jù)需要設(shè)置泵的最高壓力、低壓力和流量。
  三、儀器設(shè)置與平衡
  1.設(shè)置溶劑混合比例和流速:
  在工作站中設(shè)置溶劑混合比例和流速,自動(dòng)運(yùn)行高壓泵。
  2.排氣泡與清洗:
  擰松泵右側(cè)的快速清洗閥,按下泵前面板右下方的“Purge”鍵,排泵內(nèi)氣泡。待氣泡排完后,擰緊快速清洗閥。
  如有需要,可用超純水清洗進(jìn)樣閥等部件。
  3.柱平衡:
  在設(shè)定條件下進(jìn)行柱平衡,時(shí)間通常為30~60分鐘。
  4.檢測(cè)器設(shè)置:
  開(kāi)啟氘燈開(kāi)關(guān)進(jìn)行預(yù)熱,10分鐘后選擇波長(zhǎng)。
  根據(jù)需要設(shè)置采樣頻率、波長(zhǎng)和波段寬度等參數(shù)。
  四、建立分析方法與序列
  1.建立程序文件:
  在工作站中依次點(diǎn)擊File/New,選中“Program File”,進(jìn)入程序編輯向?qū)Ы缑妗?/div>
  設(shè)置泵的工作方式(如等度分析、二元梯度分析、多元梯度分析等)、流動(dòng)相通道、高/低壓極限和流速等參數(shù)。
  設(shè)置自動(dòng)進(jìn)樣器的參數(shù)、通道的選擇、采集時(shí)間段、紫外信號(hào)的具體設(shè)置等。
  瀏覽程序參數(shù),編輯、修改不適合處,最后單擊工具欄中的“保存”按鈕保存程序文件。
  2.建立方法文件:
  依次點(diǎn)擊File/New,選中“Method File”,進(jìn)入方法編輯向?qū)Ы缑妗?/div>
  根據(jù)需要設(shè)置方法文件的參數(shù),保存方法文件。通常將方法文件和程序文件放在同一個(gè)文件夾里。
  3.建立進(jìn)樣序列:
  依次點(diǎn)擊File/New,選中“Sequence(using Wizard)”,進(jìn)入序列編輯向?qū)Ы缑妗?/div>
  設(shè)置樣品名稱、數(shù)量、進(jìn)樣次數(shù)、進(jìn)樣體積等參數(shù)。
  如需要,可采用間隔進(jìn)樣的方式進(jìn)樣。
  設(shè)置好后,將待測(cè)樣品溶液的信息以列表的方式顯示出來(lái),并保存序列文件。
 

 

  五、進(jìn)樣與分析
  1.進(jìn)樣操作:
  采用HPLC專用進(jìn)樣針進(jìn)樣,進(jìn)樣體積應(yīng)為定量環(huán)體積的2~4倍。
  進(jìn)樣時(shí)先將進(jìn)樣針插入進(jìn)樣器,再右旋進(jìn)樣閥門將樣品全部打入,再將進(jìn)樣閥左旋回原位。等5~10秒后將進(jìn)樣針抽出。
  2.分析過(guò)程:
  點(diǎn)擊工作站中的“Start/stop Batch”鍵開(kāi)始進(jìn)樣分析。儀器將會(huì)自動(dòng)根據(jù)軟件中設(shè)定的先后順序開(kāi)始進(jìn)樣,直至所有的樣品全部進(jìn)樣。
  如軟件中相應(yīng)的位置上并沒(méi)有放置樣品瓶,儀器將會(huì)自動(dòng)識(shí)別并跳過(guò)該樣品進(jìn)下一個(gè)樣品。
  樣品分析結(jié)束后自動(dòng)保存色譜圖。
  六、數(shù)據(jù)處理與關(guān)機(jī)
  1.數(shù)據(jù)處理:
  在工作站中選擇需要處理數(shù)據(jù)的序列,點(diǎn)擊定量方法并選擇方法文件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
  根據(jù)需要設(shè)置積分參數(shù)、定量方法等,進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和結(jié)果分析。
  2.關(guān)機(jī)操作:
  先關(guān)閉氘燈電源。
  用超純水或甲醇等溶劑清洗儀器,包括進(jìn)樣閥、色譜柱等部件。
  清洗完后先停流,再關(guān)閉高壓泵和儀器電源。
  如分析過(guò)程中使用緩沖液作為溶劑,則先用超純水沖洗色譜柱約30分鐘,再用甲醇沖洗色譜柱約30~50分鐘;若只用有機(jī)溶劑和水作為溶劑,則直接用甲醇沖洗色譜柱40~70分鐘。沖洗色譜柱時(shí)溶劑流量均為1ml/min。
  七、注意事項(xiàng)
  1.日常維護(hù):定期對(duì)儀器進(jìn)行清潔和維護(hù),包括清洗進(jìn)樣閥、更換蠕動(dòng)泵清洗瓶中的甲醇等。
  2.安全操作:在操作過(guò)程中注意個(gè)人防護(hù)和安全操作規(guī)范,避免溶劑濺出或觸電等危險(xiǎn)情況發(fā)生。
  3.儀器校準(zhǔn):定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和驗(yàn)證,確保儀器性能和結(jié)果的準(zhǔn)確性。
  通過(guò)以上步驟的正確操作和使用指南,可以確保戴安高效液相色譜儀的正常運(yùn)行和準(zhǔn)確分析。

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