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小鼠白介素1(IL-1)試劑盒使用說明書

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                     小鼠白介素1(IL-1)試劑盒使用說明書

 

 

 

 

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中白介素 1(IL-1)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠白介素 1(IL-1)水平。用純化的小鼠白介

素 1(IL-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素 1(IL-1),

再與 HRP 標記的白介素 1(IL-1)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗

滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終

的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素 1(IL-1)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定

吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中小鼠白介素 1(IL-1)濃度。

試劑盒組成

 

1 30 倍濃縮洗滌液

 

20ml×1 瓶

 

7 終止液

 

6ml×1 瓶

 

2 酶標試劑

 

6ml×1 瓶

 

8 標準品(240ng/L) 0.5ml×1 瓶

 

3 酶標包被板

4 樣品稀釋液

5 顯色劑 A 液

6 顯色劑 B 液

標本要求

 

12 孔×8 條

6ml×1 瓶

6ml×1 瓶

6ml×1/瓶

 

9 標準品稀釋液

10 說明書

11 封板膜

12 密封袋

 

1.5ml×1 瓶

1 份

2 張

1 個

 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

 

120ng/L

60ng/L

30ng/L

15ng/L

7.5ng/L

 

5 號標準品

4 號標準品

3 號標準品

2 號標準品

1 號標準品150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,

然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在 5 分鐘內,如標本數量多,*使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值

大于標準品孔孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計

算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

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