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北京百奧創新科技有限公司
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酵母雙雜交文庫構建技術服務

時間:2019/3/14閱讀:2132
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酵母雙雜交文庫構建技術服務介紹
酵母雙雜交技術產生以來,主要應用在以下幾個方向:
1、檢驗一對功能已知蛋白間的相互作用。
2、 研究一對蛋白間發生相互作用所必需的結構域。
3、 用已知功能的蛋白基因篩選雙雜交cDNA文庫,以研究蛋白質之間相互作用的傳遞途徑。
4、分析新基因的生物學功能,即以功能未知的新基因去篩選文庫。通常依靠報告基因的轉錄激活來鑒定蛋白相互作用。將一個基因克隆到"誘餌"載體,并和GAL4蛋白的DNA結合域(DBD)表達為融合蛋白。將第二個基因或者編碼可能的相互作用子蛋白的cDNA文庫克隆到"獵物"載體,同GAL4的轉錄激活域(AD)表達為融合蛋白。當兩個蛋白相互作用時,AD和DBD間距離被拉近,從而激活報告基因的表達。
本服務項目使用infusion重組系統進行重組,使用zhuan利的cDNA合成方法進行cDNA的合成。
實驗步驟
1.1.RNA提取
1.2.mRNA分離
1.3.cDNA合成(使用酶促法直接合成,不經過PCR擴增過程,比SMART方法質量大大提高)
1.4.cDNA長度分級
1.5.分級后的cDNA與酵母雙雜載體(pGADT7、pGADT7-REc2、pDEST22、pB42AD、pPR3N等載體,或者客戶載體)進行infusion重組。
1.6.重組后產物電轉化感受態細胞
1.7.文庫鋪板檢測與菌液保存
1.8.文庫質粒提取
產品內容
我們提供構建好的酵母文庫的甘油菌液(含20%甘油的LB培養基),文庫甘油菌,隨機克隆子的PCR鑒定圖譜,文庫構建報告,酵母雙雜交篩選相關細胞和質粒。
質量標準
3.1文庫庫容量:大于1*10^7CFU。
3.2平均插入片段:大于1.2Kbp。
3.3陽性率:大于95%。
服務時間
20個工作日內
備注1:該酵母文庫可以選擇增加均一化處理步驟,我們使用DSN法均一化方法,可以構建出高質量的均一化酵母雜交文庫,可以大大減少后續酵母篩選的工作量和篩選效率等。
提供的產品
詳細的實驗報告
酵母雙雜交(酵母單雜交)文庫質粒、菌液
備注2:如果客戶需要轉化酵母,我們可提供100管酵母甘油菌工作液及母液(同clontech)。
服務周期
獲得合格的總RNA后25工作日,如需轉化酵母延長15個工作日。
材料要求
客戶構建的酵母雙雜交cDNA文庫,由客戶提供組織、細胞或總RNA給我們即可:細胞樣本:細胞數量大于1*10^7
動物樣本:大于1g
物樣本:大于2g
總RNA:大于200u
服務流程 
1、提交項目課題相關需求和資料。 
2、與我們的專業技術團隊討論項目細節。 
3、根據討論后的意見對實驗方案進行修改。 
4、雙方均滿意并達成一致,簽訂技術服務合同。 
5、開展實驗,按期完成合同規定的內容。 
6、結題,提供實驗原始結果和分析結果、實驗流程、實驗條件等等。 
咨詢與訂購 
感謝您選擇我們的服務,如果您有任何問題,請聯xi我們,我們將竭誠為您解答和服務。

 

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