ELISA實驗是實驗室zui常見的實驗方法之一,可用于elisa測定的標本十分廣泛,包括體液(如血清、血漿)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、細胞培養上清、細胞、組織勻漿等均可作標本以測定其中某種成份。有些標本可直接進行測定,有些則需經預處理。下面我們來詳細介紹一下各種樣本具體的處理方法及保存:
ELISA常見樣本之:血清樣本:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
Elisa常見樣本之:血漿樣本:
根據試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
Elisa常見樣本之:尿液、胸腹水、腦脊液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
Elisa常見樣本之:細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
Elisa常見樣本之:細胞樣本:
檢測細胞的成份時,對于貼壁細胞,去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞10秒后,細胞就會被裂解。對于懸浮細胞,離心收集細胞,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍.加入適量裂解液,用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續操作。
Elisa常見樣本之:組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制劑。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
以上為elisa實驗中常見樣本的處理方法詳細介紹,其他樣本處理方法可上海研伴實業有限公司。
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