液相色譜色譜柱是色譜系統的核心。在堿性分析物分析方面,制藥業一直是HPLC色譜柱向高速、高分辨率、更好的峰形發展的主要驅動力。此外,QC實驗室已經被要求改進色譜柱的批次重現性。從70年代到90年代,在填充材料的標準顆粒尺度(10-3μm)的逐級縮小方面已經有穩定的改進。80年代后期,高純度B型硅材料(低金屬含量)的引入是一個巨大進步,減少了硅醇的活性,并在批次間的一致性方面有重大改進。現在高純硅的使用是所有現代硅膠基質色譜柱的標準。
液相色譜仍然是一個高度有活力的領域,在儀器、色譜柱技術、應用等方面有很多創新。醫藥科學家們zui初將這些新技術應用于研究、開發和質量控制,他們是這項技術的早期采納者,同時也是受益者。UHPLC在研究與開發領域被快速的接受,并逐漸成為標準的液相色譜平臺,雖然在QC實驗室的應用速度慢一些。新的色譜柱技術可以更快和更有效的分析復雜樣品、手性分子和生物分子。zui后,液相色譜和2-D LC與高分辨率質譜聯用技術的快速進展,已經*改變了生命科學的研究,并將會在臨床診斷方面產生更大的影響。這些進展得到了在快速發展的藥物開發領域工作的分析化學家的歡迎。
液相色譜的另一個重要的好處是其對復雜樣品的分離能力。這方面常常被忽視,在文獻中也很少報道。在合理的時間跨度(~1 h)內,400至1000范圍內的峰容量(PC)已經通過使用液相色譜來證實。峰容量是分辨率為1.0時,色譜圖上可以分辨的色譜峰個數;通常傳統的HPLC為200左右。有史以來*次,液相色譜可以在單一維度,對復雜的藥品、天然材料、和其他困難樣品基質提供更有效的分析。通過兩個應用 (植物提取物和*的消化蛋白質)來說明Pc>300時,當前液相色譜的高分辨分離能力。
液相色譜色譜柱技術的近期進展已經被廣泛地綜述(已經有很多文獻綜述并討論了HPLC的色譜柱技術的近期進展)。總結了重大行業使用率較高的,用于提高生產力、穩定性、選擇性或保留時間(亞2μm,核殼粒子,混合物,新奇的鍵合反應,HILIC)或專業應用 (手性化合物或生物分子)的色譜柱。
液相色譜的其他優勢包括溶劑節省(5-15倍),增強的質量靈敏度(3-10倍),以及在保留時間(2–3倍)和峰面積(<0.1%RSD)方面的性能。注意,有關液相色譜中UV檢測靈敏度增加的報告往往會產生誤導,因為質量敏感度(分析物注入量)主要與柱的空隙體積有關。通常,液相色譜不會增加濃度靈敏度(的一種靈敏度),因為我們不能希望使用小的流通池來增加信噪比,除非延長流通池的路徑長度 (如60毫米)。泵混合而導致的粘性發熱、基線擾動以及方法轉移等潛在問題已經有文獻描述,而且這些問題分別也是與特定的儀器相關聯的。一般來說,這些技術問題已經研究得比較清楚了,而且通過選擇合適的系統配置(如混合器體積)能夠很容易地減輕。但是, 由于培訓、與驗證數據系統的兼容性和其他方法轉移的問題,液相色譜在QC實驗室的應用仍然比較浪費時間。
液相色譜色譜柱技術的近期進展已經被廣泛地綜述(已經有很多文獻綜述并討論了HPLC的色譜柱技術的近期進展)。總結了重大行業使用率較高的,用于提高生產力、穩定性、選擇性或保留時間(亞2μm,核殼粒子,混合物,新奇的鍵合反應,HILIC)或專業應用 (手性化合物或生物分子)的色譜柱。