反相液相色譜法測定食品中的1號
甘源，趙艦， 肖義夫，王正虹，顧萬江
[摘要] 目的：建立反相液相色譜法測定食品中的1號的方法。方法：食品中的1號經(jīng)乙醇提取
后用反相液相色譜一二極管陣列檢測器（DAD）測定。結(jié)果：該方法線性范圍從0．5～1000 fig／m1，標準差為0．18，
相對標準偏差為0．73％，平均回收率為95．43％，zui低檢出限為0．2 ng，zui低檢出濃度為0．02 mg／kg。人工合成色素（檸
檬黃、日落黃、胭脂紅、莧菜紅、亮藍、靛藍、靛藍）不干擾其測定。結(jié)論：該方法線性范圍廣、精密度高、準確度好、
選擇性強，完滿足食品中1號的定性定量分析。
[關(guān)鍵詞] 反相液相色譜；食品；1號
[中圖分類號】R122．7 [文獻標識碼]A [文章編號】1003—8507（2005）12—1760—02
TO Dj朗：嘲’THE SUDAN I IN FOOD USING METHOD OF RE—HI'LC．GAN Yuan，ZHAO Jian，XIAO Yi— ，et a1．
Centrofor Disease Control and Prevention ofChongqing Gty，Chongqing，400042．
Abstaet：Objective：Toevaluatethemethxt of detection of Sudan I infoodsbased OI3．theuseof RE—HPU ．Methods：Sudan
1 in foods were detected by re-HPLC—DAD after extracted by alcoho1．Results：This method could detect Sudan I in samples ef—
fectlvdy while its eoneentrat~on va．~ed from 0．5~g／rnl to 1 000 I-tg／m1．The stan dard deviation WaS 0．18．relative standard devia—
tion was 0．73％ ，an d average recovery Was 94．43％ ． 0．2 ng was observed as its detection limit，while the concentration limit Was
0．2mg／Kg．Artificial synthesized pigments hadI10disturbanceintheprocess．Conclusion：Thismethodisvalidatedintdh ofdetection
limitS，linearity，sensitivity，accuracy an d selectivity in detection of Sudan I in foods．
Keywords：Re—HPLC；Foods；Sudan 1
1號化學名稱為1一偶氮苯基一G一萘酚，是用于溶解劑、油彩、蠟、地板蠟、機油、鞋油、香皂等化工產(chǎn)品中的一種非生物合成著色劑，不溶于水易溶于有機溶劑乙醇、乙腈、氯仿等，分子式：CJ6Hl2 N20，分子量：248。本品具有致癌性，國內(nèi)外有關(guān)規(guī)定均嚴禁在食品中使用1號。
1 材料與方法
1．1 原理1號染ls}經(jīng)乙醇提取后，超濾，濾液經(jīng)液相色譜Cl8柱分離，用二極管陣列（DAD）檢測器在478c丌1處進行檢測，以保留時間定性，以峰高或峰面積定量。
1．2 儀器與試劑
1．2．1 乙腈（色譜純）、水（超純水，其電阻率>18．2Mf1）、冰醋酸（分析純）、無水乙醇（分析純）
1．2．2 標準貯備溶液精密稱取0．1000 g1號標準品（分析純），以乙醇溶解并轉(zhuǎn)人100ml容量瓶中，并以乙醇稀釋定容至刻度，即為1 g／L的標準貯備液。標準系列的配制：用：丕步稀釋法將乙醇稀釋為0、0．5、[作者單位]重慶市疾病預(yù)防控制中心，重慶，400042
[作者簡介]甘源（1972-），女，本科，主管技師，主要從事食品衛(wèi)生檢驗工作．
1．0、2．0、4．0、10．0及20．0~g／mL的標準系列。

1．2．3 儀器液相色譜儀：AgilentlO00型，具DAD檢測器，Agilent ZORBAX Cl8柱（150 C'ft×4．6 rnnl，3／an）、萬分之一天平、超聲波萃取儀
1．3 樣品前處理樣品制備：將采集樣品放入一個容量較大的密閉容器中混合均勻。對于固體樣品要用打漿機或粉碎機磨細。
1．3．1 甜椒或紅辣椒粉稱取10 g（準確至0．01 g）樣品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
1．3．2 粉狀調(diào)味品稱取5 g（準確至0．01 g）樣品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
1．3．3 調(diào)味辣椒醬、原味辣椒醬、辣椒油等，稱取20 g（準確至0．01g）樣品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
1．3．4 肉及肉制品稱取20 g（準確至0．01 g）樣品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
以上樣品經(jīng)超聲提取1 h后過濾于三角瓶中，如果濾液渾濁，則取濾液于12000 r／min離心10 min，濾液根據(jù)待測物含量的高低進行濃縮或稀釋，測定前取一部分過0．45岬膜，濾液待測。
1．4 色譜條件流動相：0．1％ （體積分數(shù)）乙酸+乙腈=20+80：

現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學2oo5年第32卷第12期Modem Preventive Medicine，2oo5，vl01．32，2
色譜柱：Agilent ZORBAX Cl8柱（150 cn1×4．6咖，3／an），柱溫：常溫；流速：1．0 ml／min，恒流；二極管陣列檢測器，檢測波長：478 nln，峰寬40 nln，參考波長360 nln，峰寬100 nm；
進樣量：10 l。
1．5 方法將配制好的標準系列及處理好后的樣品于上述色譜條件下測定，標準色譜圖見圖1，樣品色譜圖見圖2。
圖1 標準色譜圖
圖2 樣品色譜圖
2 結(jié)果與討論
2．1 線性范圍的測定
2．1．1 標準系列1的測定將0、0．50、1．0、2．0、4．0、10．0、20．0 gg／ml的標準系列，每個標準進10 分析，測定結(jié)果見表1。
表1 標準系列1的測定結(jié)果
標準濃度（gg／mL） 0 0．50 1．0 2．0 4．0 10．0 20．0峰面積（roAU*S） 0 1．12 2．85 4．85 9．72 24．57 48．69以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。回歸方程：y=2．43x+0．076；
a=0．076，b=2．43；7=0．99992．1．2 標準系列2的測定 將0．20．0、50．0、100．0、
200．0、500．0及1000．0~g／ml的標準應(yīng)用液，每個進10 1分析，測定結(jié)果見表2。
表2 標準系列2的測定結(jié)果

面積為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。
回歸方程：y=2．53x一10．17；
a=10．17，b=2．53；7=0．9999
由上述結(jié)果可知，在0．5 ～1000~g／ml范圍內(nèi)線性良好。
2．2 精密度試驗分別取1、10和40 pg／mL標準應(yīng)用液每個濃度重復(fù)測定9次，其標準差分別為：0．040、0．18和0．30；相對標準偏差（變異系數(shù)）為：1．41％、0．73％和0．31％；測定結(jié)果見表3。
表3 3個濃度精密度試驗結(jié)果（gg／m1）
2．3 準確度試驗于樣品中分別加入2．0，10及40 vg／ml1號標準，作加標回收試驗，測定結(jié)果見表4。
表4 準確度試驗結(jié)果（~g／m1）
2．4 zui低檢出限的測定 實驗測得其zui低檢出限0．2 ng，如果樣品取10 g，提取后zui后定容至10 rnl，進10 分析，則zui低檢出濃度為0．02mg／kg。
2．5 提取溶劑的選擇本方法選擇了無水乙醇、乙腈作為萃取劑，經(jīng)檢測無水乙醇與乙腈的提取效果相同，本著經(jīng)濟、安全的原則，zui終確定選無水乙醇作的樣品的提取溶劑。
兩種溶劑的提取效果試驗：分別選取3種不同性狀的樣品，均加入10~g／rnl的1號標準溶液，分別用無水乙醇和乙腈提取，兩種溶劑提取效果無差異，見表5。
表5 兩種提取溶劑各樣品的蜂面積（mAu*S）
2．6 干擾試驗將樣品中分別加入人工合成色素檸檬黃、日落黃、胭脂紅、莧菜紅、亮藍、靛藍等，均不干擾1號測定，見圖3。
圖3 混合色素色譜圖