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細胞凍存實驗步驟

來源:上海邦景實業有限公司   2025年06月16日 16:17  

細胞凍存實驗步驟:

1. 制備凍存液,凍存液比例:本實驗室采用70%基礎培養基+20%FBS+10%DMSO,不同實驗室及不同細胞可能略有差異,也可采用55%基礎培養基+40%FBS+5%DMSO;

2. 取形態良好,處于對數生長期的細胞,對其消化、離心 (1500rpm離心8min)、計數;

3. 根據細胞數量加入對應的凍存液,使細胞密度維持在300-500w/mL;

4. 小心用鑷子打開凍存管管蓋,每管分裝1-1.5mL含細胞的凍存液,擰緊蓋管,做好標記。

5. 分裝好的凍存管轉入程序降溫盒后直接放-80℃過夜;

6. 若沒有程序降溫盒,則按下列順序依次降溫:室溫→4℃20min→-20℃30min→-80℃過夜,注意轉移過程中要保冷,避免產生溫差或凍存管融化;

7. 從-80℃冰箱取出凍存管迅速轉移到液氮長期保存。


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