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原代細胞的提取操作過程

來源:上海邦景實業有限公司   2025年06月24日 15:09  

原代細胞的提取的整個操作過程:
1. 整個操作要在潔凈通風的超凈臺下進行,所有的器件要高壓消毒。
2. 依據BALB/c小鼠的體重,用10ml/kg3%濃度的麻醉;將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內,這一步不只能夠消毒,也能夠讓小鼠體毛浸濕,后續剃去皮毛的時分不會沾到剪刀或安排上。
3. 用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,裝有PBS的注射器刺進心尖,同時在右心耳處剪開一個小口,緩慢推進注射器,隨著心臟的跳動,將體內的血液沖洗出來。
4. 取出小鼠的肺部安排,將肺安排切成小米粒樣的巨細,置于預冷的HBSS中反復沖洗幾回。
5. 將小米粒巨細的肺安排置于培育瓶中(培育瓶前一天用1%明膠溶液包被培育面,4度過夜,小鼠處理前,將培育瓶放置培育箱中,使其溫度恢復至37度),置于培育箱37度的環境下,消化4個小時。
6. 消化4小時后,參加RPMI1640培育基(有10%血清、1%雙抗、1%內皮細胞成長因子)10ml(*增加培育基,能夠是正常培育時的2倍量),持續培育24小時(持續培育的時刻可依據細胞貼壁狀況適當調整)。
7. 24小時后,取出肺安排,鏡下觀察細胞狀態,換液。
8. 原代細胞的提取和培育是很慢的過程,一般需比及24小時后,才能在鏡下看到些許細胞群,一周到兩周后才會看到鵝卵石樣的擺放狀況。
9. 原代細胞2-3天換液一次,由于內皮細胞成長形成單層時,會出現接觸抑制現象。所以,內皮細胞成長挨近單層時就能夠傳代了,不要比及長得非常滿。


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