薄層色譜操作步驟

 

    完成TLC分析通常需經制板、點樣、展開、檢出4步操作。

 

    ⑴制板

 

    在一平面支持物(通常為玻璃)上，均勻地涂制硅膠、氧化鋁或其他吸附劑薄層、樣品的分離、檢測就在此薄層色譜板上進行。

 

    一般選用適當規格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄層板規格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。稱取適量硅膠，加入0.2％～0.5%羧甲基纖維素鈉溶液（CMC-Na），充分攪拌均勻，進行制板。一般來說10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅膠/塊；硅膠與羧甲基纖維素鈉的比例一般為1：2～1：4。制好的玻璃板放于水平臺上，注意防塵。在空氣中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放涼，并將其放于紫外光燈(254nm)下檢視，薄層板應無花斑、水印，方可備用。

 

    ⑵點樣

 

    用微量進樣器進行點樣。點樣前，先用鉛筆在層析上距末端lcm處輕輕畫一橫線，然后用毛細管吸取樣液在橫線上輕輕點樣，如果要重新點樣，一定要等前一次點樣殘余的溶劑揮發后再點樣，以免點樣斑點過大。一般斑點直徑大于2mm，不宜超過5mm.底線距基線1～2．5cm，點間距離為lcm左右，樣點與玻璃邊緣距離至少lcm，為防止邊緣效應，可將薄層板兩邊刮去1～2cm，再進行點樣。

 

    ⑶展開

 

    將點了樣的薄層板放在盛在有展開劑的展開槽中，由于毛細管作用，展開溶劑在薄層板上緩慢前進，前進至一定距離后，取出薄層板，樣品組分固移動速度不同而彼此分離。

 

    ①展開室應預飽和。為達到飽和效果，可在室中加入足夠量的展開劑；或者在壁上貼兩條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封室頂的蓋。

 

    ②展開劑一般為兩種以上互溶的有機溶劑，并且臨用時新配為宜。

 

    ③薄層板點樣后，應待溶劑揮發完，再放人展開室中展開。

 

    ④展開應密閉，展距一般為8～15cm。薄層板放入展開室時，展開劑不能沒過樣點。一般情況下，展開劑浸入薄層下端的高度不宜超過0.5cm。

 

    ⑤展開劑每次展開后，都需要更換，不能重復使用。

 

    ⑥展開后的薄層板用適當的方法，使溶劑揮發完全，然后進行檢視。

 

    ⑦Rf值一般控制在0.3～0.8，當Rf值很大或很小時，應適當改變流動相的比例。

 

    ⑷斑點的檢出

 

    薄層色譜展開后的薄層板經過干燥后，常用紫外光燈照射或用顯色劑顯色檢出斑點。對于無色組分，在用顯色劑時，顯色劑噴灑要均勻，量要適度。紫外光燈的功率越大，暗室越暗，檢出效果就越好。

 

    展開分離后，化合物在薄層板上的位置用比移值(Rf值)來表示?；衔锇唿c中心至原點的距離與溶劑前沿至原點的距離的比值就是該化合物的Rf值。