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江蘇科特商貿(mào)---各類組織的取材技術(shù)

時間:2015/5/21閱讀:327
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(皮膚和粘膜的取材  
    皮膚和粘膜是上皮細(xì)胞培養(yǎng)的重要組織來源,主要取自于手術(shù)過程中的皮片,方法似外科取斷層皮片手術(shù)操作,但面積一般2~4cm2即可,這樣局部*痕,若對燒傷皮膚進(jìn)行上皮細(xì)胞膜片移植,可從大腿或臀部取較大皮片,可取2~4cm2皮片,但取材時不要用碘酒消毒;若培養(yǎng)上皮細(xì)胞,取材時不要切取太厚,盡可能去除所攜帶的皮下或粘膜下組織;若欲培養(yǎng)成纖維細(xì)胞,則反之。皮膚粘膜與外界相通部位,因表面細(xì)菌、霉菌很多,取材時應(yīng)嚴(yán)格消毒,必要時要用高濃度抗菌素和適量兩性霉素B漂洗、浸泡。  
()內(nèi)臟和實體瘤的取材  
    內(nèi)臟除消化道外基本是無菌的,但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位,實體瘤取材時要取腫瘤細(xì)胞豐富的區(qū)域,要避開破潰、壞死液化部分,以防污染,盡量去除混雜的結(jié)締組織,否則培養(yǎng)后,由于成纖維細(xì)胞的生長給以后的培養(yǎng)工作增加困難。

()血液細(xì)胞的取材  
    血液及淋巴組織中的血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的取材,一般多抽取靜脈外周血,或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細(xì)胞,取材時應(yīng)注意抗凝,通常采用肝素抗凝,常用肝素濃度為8~10u/mL血,抽血的針筒也要用肝素濕潤,若從血站取來的獻(xiàn)血員的血液,因血站不用肝素抗凝劑,常用含枸椽酸鹽抗凝,對此類血標(biāo)本千萬不能用含鈣、鎂離子的洗液來處理細(xì)胞,因此時的鈣、鎂離子可加速血液中*促進(jìn)血液凝固而影響收獲血細(xì)胞及淋巴細(xì)胞。此外要嚴(yán)格無菌,盡量新鮮使用。  
()骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞取材  
    取上述標(biāo)本時,除嚴(yán)格無菌,注意抗凝外,還要盡快分離培養(yǎng),一般無需其他處理,離心后,用無鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng),不宜低溫存放。

()動物組織取材  
1
、鼠胚組織取材  
   
首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物,然后將其整個浸泡在含有75%酒精的燒杯中,5分鐘后(注意時間不能太長,以避免酒精從口或其他通道進(jìn)入體內(nèi),影響組織活力),取出動物,在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢,切開皮膚,用無菌操作法解剖取胚或用無菌*挾起皮膚、用無菌眼科剪沿軀干中部環(huán)形剪開皮膚,用*分別挾住兩側(cè)皮膚拉向頭尾,把動物反包,暴露軀干,然后再固定,更換無菌解剖器材,采用無菌操作法解剖取出胚胎。  
2
、幼鼠胚腎(或肺)取材  
   
幼鼠采用上述方法處死消毒后,腹部朝上固定在木板上,先切開游離毛皮并拉開至兩側(cè):然后采用無菌法打開胸腔取肺,或背部朝上固定在木板上,先將背部毛皮切開游離并拉向兩側(cè),然后采用無菌法從背部打開腹腔取腎。  
(
)人胚體組織取材  
   
在局部先用碘酒后用75%酒精棉球消毒,無菌法取人胚肺(腎),方法與鼠類相同。  
(
)雞(鴨)鳥類胚胎組織取材  
   
取孵化至適當(dāng)胚齡(9~12天)的胚蛋,用照蛋燈在暗處燈檢,若有豐富血管、胚體有運動的胚蛋,說明胚體發(fā)育良好,并用有色筆劃出氣室和胚體位置。將胚蛋置于蛋架上,先用溫水清洗蛋殼,再用75%酒精棉球擦干,經(jīng)碘酒、75%酒精消毒后,在無菌條件下采用無菌法用剪刀或中號鑷子打開氣室,沿氣室邊緣去除蛋殼,再用*撕去殼膜,暴露出雞胚,再用彎頭鑷輕挑起胚頭,取出胚胎,放入無菌平皿中,解剖取材。  


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