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科特商貿(mào)Elisa試劑盒競爭法測抗原的原理與步驟

時間:2015/5/25閱讀:476
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    Elisa試劑盒競爭法測抗原的原理

    當抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺于陰性反應。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質(zhì),直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì),然后再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合,抗HBc ELISA一般采用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合,洗滌后再加入酶標抗體,與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般采用此法。

    Elisa試劑盒競爭法測抗原的實驗步驟 

    1.  以稀釋液將待檢標本做適當稀釋(預試中確定)加入包被有已知抗原的酶標板中(50ul/孔),加封口膠帶于37℃作用30min

    2.  棄反應液,以沖洗液連續(xù)洗板5次并于吸水紙上拍干。

    3.  加入酶標抗體(濃度在預試中確定)。加封口膠帶后于37℃作用30min

    4.  重復第2步。

    5.  加底物(濃度在預試中確定),加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min,其間不時觀察,顯色滿意后加終止液50ul/孔。

    6.  于酶標儀測定OD值,OPD492nm測定,TMB450nm測定。

    Elisa試劑盒競爭法測抗原的注意事項 

    1.  每次實驗均應做陰性對照、陽性對照及空白對照(以PBS代替標本),后者為本底值,在分析實驗結果時應扣除本底值,陽性對照<陰性對照<空白對照實驗成立。

    2.  一般認為小分子抗原宜用本法檢測,而大分子抗原則宜采用夾心法檢測,但具體宜采用哪種方法應根據(jù)試驗決定,本發(fā)與夾心法相比在操作上減少一步。包被抗體與酶標抗體如果分別采用單克隆抗體和多克隆抗體時,宜用單克隆抗體作為包被抗體,以多克隆抗體作為酶標抗體。

    3.  血清標本中抗原濃度一般較低,故一般用原倍標本進行檢測,必要時可進行稀釋測定,但應重新摸索酶標抗原的濃度,以確保方法的靈敏性。

    4.  以酶標記抗原的方法同酶標記抗體。

    5.  其它注意事項同酶聯(lián)免疫間接法。


    Elisa試劑盒競爭法測抗原的原理與步驟中,如您有任何疑問方可,我們將竭誠為您服務!




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