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細胞支原體污染的一般情況及預(yù)防措施

時間:2015/5/28閱讀:248
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    細胞株若受到細菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之污染時,會嚴重的影響實驗的結(jié)果。而細菌、真菌等之微生物污染時,較易自培養(yǎng)基等的外觀變化察覺。但是若受到支原體之污染時,細胞之外觀較無明顯變化,但是其污染會造成細胞之生長速率緩慢、細胞產(chǎn)生病變之型態(tài)改變等等變化。

一、造成支原體高污染率的原因為: 
      1、支原體size 0.1~0.8 um,無細胞壁,可透過一般過濾膜(0.22-0.45 um 
      2、支原體污染時,沒有明顯的肉眼或一般光學顯微鏡可觀察到的特征變化 
      3、過去缺乏簡單、快速且可靠的檢測方式 
      4、細胞流通間缺乏品管,造成實驗室間的相互污染 
      5、研究或操作人員忽略污染問題

二、支原體污染了來源: 
      1、已受污染的細胞 
      2、操作人員的疏失 
      3、已受污染的培養(yǎng)基血清 
      4、操作環(huán)境不良、實驗器具不潔等

    由于支原體為人體口腔中之正常菌叢,實驗室之操作人員的污染亦可能為污染源,須十分注意。而萬一細胞已受支原體污染時,*的處理原則為將細胞高壓滅菌后丟棄,以免污染其它潔凈的細胞株。但是若是堅持要作去除支原體污染,有以下幾種方法,只不過結(jié)果會與原始的細胞特性有差異。

三、去除支原體污染:  
      1、抗生素處理:BM-cyclinRoche),MRAmycoplasma removal agentICN),CiprofloxcinBayer),EnrofloxacinBayer 
      2Nucleic acid metabolites5-bromouracilHoechst 33258bromodeoxyuridine 
      3Anti-sera

四、預(yù)防與控制方面可從以下各點加強注意:

      1、設(shè)備方面: 
      (1)、使用已作支原體測試ok之細胞株 
      (2)、于另一隔離之區(qū)域操作未知是否有支原體污染之細胞 
      (3)、使用不添加抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞 

      2、檢測方面:定期以標準的支原體檢測方法檢測細胞、培養(yǎng)基、血清、ddH2O有否被支原體污染。

    實驗操作人員之無菌觀念與無菌操作技術(shù)之要求

五、支原體之檢測---直接培養(yǎng)法

    原理:直接培養(yǎng)支原體于培養(yǎng)基中,觀察其生長及菌落生成。

    特點:是目前zui直接與靈敏之步驟,亦是用來評估其它偵測新步驟之標準步驟。

    缺點:培養(yǎng)時間長,須35星期才能判斷。有些支原體不能在培養(yǎng)基培養(yǎng)出來。需同時培養(yǎng)支原體株作為正反應(yīng)對照組,可能會造成污染。

    支原體生長較慢,所以先在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)1~2周增殖后,再培養(yǎng)于agar plate上。需至少培養(yǎng)3星期后,才可斷定是否有支原體污染。所以整個測試需5個星期才知正確結(jié)果。




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