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江蘇科特商貿有限公司
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冷凍細胞活化的方法

時間:2015/8/20閱讀:263
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1、冷凍細胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害,導致細胞之死亡。 

2
、細胞活化后,約需數日,或繼代一至二代,其細胞生長或特性表現才會恢復正常(例如產生單株抗體或是其它蛋白質)。 

3
、材料 37℃恒溫水槽、新鮮培養基、無菌吸管/離心管/培養瓶、液氮或干冰容器

4、步驟: 

1)操作人員應戴防護面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害。 

2)自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時蓋子易松掉。

3)將新鮮培養基置于37℃水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內。

4)取出冷凍管,立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,以70%酒精擦拭保存管外部,移入無菌操作臺內。 

5)取出解凍之細胞懸浮液,緩緩加入有培養基之培養容器內(稀釋比例為110115),混合均勻,放入CO2培養箱培養。取0.1ml解凍細胞懸浮液作存活測試。

6)解凍后是否立即去除冷凍保護劑(例如DMSOglycerol),依細胞種類而異,一般而言,大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除,則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10ml培養基之離心管內,離心1000rpm5分鐘,移去上清液,加入新鮮培養基,混合均勻,放入CO2培養箱培養。 

7)若不需立即去除冷凍保存劑,則在解凍培養后隔日更換培養基。 



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