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ELISA四種檢測法優(yōu)缺點比較

時間:2015/2/12閱讀:7569
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ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫剖析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附實驗的規(guī)范程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再參加一級檢測抗體(primarydetection Ab),構(gòu)成一個抗原抗體的復合物ELISA四種檢測法優(yōu)缺點比較如下:

1.直接法(direct ELISA) 

將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。

優(yōu)勢:操作手續(xù)簡略,因無須運用二抗可防止交互反響。

缺陷:實驗中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費用相對進步。

2.間接法(indirect ELISA) 

此測定辦法與直接法相似,不一樣在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

優(yōu)勢:二抗能夠加強信號,并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它zui多的免疫反響性。

缺陷:交互反響發(fā)作的機率較高。

3.雙抗體夾心法(sandwich ELISA) 

被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其間一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選擇,才可防止交互反響或競爭一樣的抗原部位。

優(yōu)勢:高活絡、高專一性,抗原無須事前純化。

缺陷:抗原必定得具有兩個以上的抗體部位。

4.競爭法(competitive ELISA) 

樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體,當樣品里的自在抗原越多,就能夠越多的抗體,而固定抗原就只能到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清潔過程,洗去自在抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬,依據(jù)呈色區(qū)別就可計算出樣品里的抗原含量。

優(yōu)勢:可適用比擬不純的樣本,并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

缺陷:全體的敏感性和專一性都較差。

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